7 Teknik Pengamatan Objek dengan Mikroskop Elektron



Beberapa teknik yang paling penting yang diadopsi untuk pengamatan objek di bawah mikroskop elektron adalah: (1) Shadow-casting (2) Pewarnaan Negatif (3) Ultra-thin Sectioning (4) Freeze-etching (5) Lokalisasi Konstituen Sel (6) Lokalisasi Enzim (7) Autoradiografi.

(1) Pengecoran bayangan:

Dalam pengecoran bayangan, objek mikroskopis dikeringkan dalam kotak khusus yang ditempatkan di dalam tabung vakum.

Lapisan logam yang sangat tipis (misalnya platina) diendapkan pada objek dari filamen yang sangat panas pada sudut miring, sehingga objek menghasilkan bayangan pada sisi yang tidak dilapisi.

Pemeriksaan bayangan bayangan memberikan informasi mengenai bentuk objek (fitur topografi permukaan objek), yang dapat diamati dengan pemindaian mikroskop elektron.

(2) Pewarnaan Negatif:

Teknik ini diikuti untuk mengamati detail benda yang sangat kecil, seperti virus dan flagela bakteri. Bahan buram elektron seperti asam fosfotungstat atau garamnya dibiarkan membentuk lapisan endapan tebal di permukaan objek, tanpa masuk ke dalamnya. Ketika elektron dari senjata elektron mikroskop elektron tidak dapat melewati permukaan yang dilapisi ini, struktur ini menjadi terlihat jelas.

(3) Pemotongan ultra-tipis:

Sel mikroba utuh terlalu tebal untuk memungkinkan visualisasi struktur halus internal di bawah mikroskop elektron. Untuk pengamatan struktur halus intraseluler, sel tertanam dalam blok bahan plastik dan dipotong menjadi bagian ultra tipis (setipis 60 nm).

Struktur yang tepat ditafsirkan dengan mengamati beberapa irisan ultra-tipis yang dibelah pada tingkat yang berbeda dan pada sudut yang berbeda. Perbaikan kontras struktur dimungkinkan melalui penggunaan noda khusus, seperti garam uranium dan lantanum.

(4) Etsa beku:

Untuk mendapatkan bagian ultra-tipis dari suatu objek, itu harus diperbaiki dengan perawatan kimia. Perawatan kimia semacam itu menghasilkan artefak. Artefak ini diatasi dengan etsa beku. Dalam etsa beku, spesimen dibekukan di dalam balok dan dipotong-potong, selagi masih berada di dalamnya dalam kondisi beku.

(5) Lokalisasi Konstituen Sel:

Ini adalah teknik khusus yang dilakukan untuk menemukan konstituen kimia sel. Misalnya, untuk menemukan antigen dalam sel, bagian sel yang sangat tipis diberi perlakuan dengan antibodi berlabel feritin, yang berikatan dengan antigen untuk membentuk kompleks antibodi-antigen berlabel feritin.

Karena ferritin adalah zat yang mengandung besi dengan kepadatan tinggi, kompleks antibodi-antigen secara nyata mempengaruhi lintasan berkas elektron, sehingga menghasilkan kontras tinggi untuk pengamatan yang jelas di bawah mikroskop elektron.

(6) Lokalisasi Enzim:

Teknik ini digunakan untuk menemukan posisi enzim di dalam sel. Misalnya, dalam mendeteksi enzim isocitrate dehydrogenase, disiapkan bagian sel bakteri yang sangat tipis. Kemudian, emas koloid ditempelkan secara khusus pada enzim, mengikuti teknik imunokimia. Enzim fiksasi emas koloid dapat diamati di bawah mikroskop elektron.

(7) Autoradiografi:

Ini adalah teknik sitokimia, di mana lokasi konstituen kimia tertentu dalam suatu objek ditentukan dengan mengamati situs, di mana bahan radioaktif diposisikan. Objek pertama kali terkena zat radioaktif untuk memungkinkan penyerapannya.

Kemudian ditutup dengan lapisan emulsi fotografi dan disimpan dalam kegelapan selama beberapa jam. Radiasi pengion yang dipancarkan selama peluruhan zat menghasilkan gambar laten dalam emulsi. Setelah pemrosesan fotografi, gambar yang dikembangkan dilihat di bawah mikroskop elektron sebagai butiran perak dalam preparat.

Related Posts