Standardisasi Tanaman Obat (Pedoman WHO)

1. Evaluasi Botani:

sebuah. Evaluasi Sensorik:

saya. Mikroskop visual:

1. Menyentuh.

aku aku aku. Bau.

1. Rasa.
2. Benda asing:

saya. Tumbuhan asing.

1. Hewan asing.

aku aku aku. Mineral asing, dll.

1. Mikroskopi:

saya. Pengamatan histologis.

1. Deteksi histokimia

aku aku aku. Pengukuran.

2. Evaluasi fisikokimia:

sebuah. Kromatografi Lapis Tipis.

1. Bahan ekstraktif

saya. Nilai ekstraktif larut air panas.

1. Bahan ekstraktif air dingin.

aku aku aku. Bahan ekstrak etanol

1. Kandungan air dan zat terbang:

LOD, Azeotropik.

1. Minyak atsiri:

Dengan penyulingan uap.

3. Evaluasi farmakologi:

sebuah. Nilai kepahitan:

persamaan satuan kepahitan larutan standar kina hidroklorida

1. Aktivitas hemolitik:

Pada darah sapi dibandingkan dengan saponin referensi standar

1. Astringensi:

Fraksi (Tanin) yang mengikat bubuk kulit standar.

1. Indeks Pembengkakan:

Di Air.

1. Indeks Busa:

Tinggi busa yang dihasilkan oleh bahan 1 gram dalam kondisi tertentu.

4. Evaluasi Toksikologi:

sebuah. Residu pestisida:

(i) Klorida organik total

(ii) Fosfor organik total.

1. Arsenik:

Strain dihasilkan pada kertas HgBr ₂ dibandingkan dengan noda standar.

1. Logam berat:

Kadmium dan timah

5. Kontaminasi Mikrobiologis:

sebuah. Total jumlah aerobik yang layak.

1. Patogen:

Enterobacteriaceae, E. coli, Salmonella, P. aerogenosa dan S. aureus

1. Aflatoksin:

Dengan KLT menggunakan campuran Aflatoksin standar (B ₁ , B ₂ , G ₁ , G ₂ )

6. Kontaminasi radioaktif.

Karakter Makroskopik:

Identitas makroskopik bahan tanaman obat didasarkan pada bentuk, ukuran, warna, karakteristik permukaan, tekstur, karakteristik rekahan dan kenampakan permukaan potongan.

(i) Ukuran:

Penggaris ukur dalam milimeter cukup untuk mengukur panjang, lebar, dan tebal bahan mentah.

Benih dan buah kecil dapat diukur dengan menjajarkan 10 buah di atas selembar kertas yang telah dikalibrasi, dengan jarak antar garis 1 mm, dan membagi hasilnya dengan 10.

(ii) Warna:

Periksa sampel yang tidak dirawat di bawah sinar matahari yang menyebar dapat digunakan. Warna sampel harus dibandingkan dengan sampel referensi.

(iii) Karakteristik permukaan, tekstur dan karakteristik rekahan:

Periksa sampel yang tidak diobati. Jika perlu, lensa pembesar dapat digunakan. Pembasahan dengan air atau reagen, sesuai kebutuhan, mungkin diperlukan untuk mengamati karakteristik permukaan potongan.

Sentuh bahan untuk menentukan apakah lunak atau keras; tekuk dan hancurkan untuk mendapatkan informasi tentang kerapuhan dan tampilan bidang patahan – apakah itu berserat, halus, kasar dan berbutir, dll.

(iv) Bau:

Jika bahan diperkirakan tidak berbahaya, letakkan sebagian kecil sampel di telapak tangan atau gelas kimia dengan ukuran yang sesuai, dan hirup udara secara perlahan dan berulang kali di atas bahan tersebut. Jika tidak ada bau yang terlihat, hancurkan sampel di antara ibu jari dan jari telunjuk atau di antara telapak tangan menggunakan tekanan lembut. Jika bahan tersebut diketahui berbahaya, hancurkan dengan cara mekanis lalu tuangkan sedikit air mendidih ke dalam sampel yang dihancurkan dalam gelas kimia.

Pertama, tentukan kekuatan bau (tidak ada, lemah, berbeda, kuat) dan kemudian sensasi bau (aromatik, buah, pengap, berjamur, tengik, dll.). Dianjurkan untuk membandingkan bau secara langsung dengan zat yang ditentukan ( misalnya peppermint harus memiliki bau yang mirip dengan mentol, cengkih mirip dengan eugenol).

(v) Rasa:

Chirata:

Pahit

Glycyrrhiza:

Manis

Lemon:

Kecut.

Penentuan Air dan Volatile Matter:

Kelebihan air dalam bahan tanaman obat akan mendorong pertumbuhan mikroba, kehadiran jamur atau serangga, dan kerusakan setelah hidrolisis. Oleh karena itu, batas kadar air harus ditetapkan untuk setiap bahan tanaman yang diberikan. Ini sangat penting untuk bahan yang mudah menyerap kelembapan atau cepat rusak jika ada air.

Metode berikut digunakan sebagai:

1. Metode azeotropik:

Azeotropik memberikan pengukuran langsung air yang ada dalam bahan yang diperiksa. Ketika sampel didistilasi bersama dengan pelarut yang tidak bercampur, seperti toluene R atau Xylene R1 , air yang _ada dalam sampel diserap oleh pelarut. Air dan pelarut didistilasi bersama dan dipisahkan dalam tabung penerima pada pendinginan. Jika pelarutnya anhidrat, air mungkin tetap terserap di dalamnya yang menyebabkan hasil yang salah. Oleh karena itu disarankan untuk menjenuhkan pelarut dengan air sebelum digunakan.

2. Kehilangan pengeringan:

Pengeringan dapat dilakukan baik dengan pemanasan hingga 100-105°C atau dalam desikator di atas fosfor pentoksida R di bawah atmosfer atau tekanan rendah pada suhu kamar selama jangka waktu tertentu. Metode pengeringan sangat berguna untuk bahan yang meleleh menjadi massa yang lengket pada suhu tinggi.

Penentuan Aktivitas Hemolitik:

Banyak bahan tanaman obat terutama yang berasal dari famili Araliaceae, Sapindaceae, Primulaceae dan Dioscoreaceae mengandung saponin. Sifat saponin yang paling khas adalah kemampuannya untuk menyebabkan hemolisis ketika ditambahkan ke suspensi darah, saponin menghasilkan perubahan pada membran eritrosit, menyebabkan hemoglobin berdifusi ke media sekitarnya.

Aktivitas hemolitik bahan tanaman, atau preparat yang mengandung saponin, ditentukan dengan membandingkannya dengan bahan pembanding, saponin R, yang memiliki aktivitas hemolitik 1000 unit per gm. Suspensi eritrosit dicampur dengan volume yang sama dari pengenceran serial ekstrak bahan tanaman. Konsentrasi terendah untuk mempengaruhi hemolisis sempurna ditentukan setelah campuran didiamkan selama periode waktu tertentu. Tes serupa dilakukan bersamaan dengan saponin.

Penentuan Indeks Pembengkakan:

Banyak bahan tanaman yang memiliki kegunaan terapeutik atau farmasi khusus karena sifat pembengkakannya, terutama gusi dan yang mengandung banyak lendir, pektin atau hemiselulosa.

Prosedur:

Timbang dengan teliti 1 gram bahan tanaman ke dalam gelas ukur bersumbat kaca 25 ml. Diameter bagian dalam silinder harus sekitar 16 mm, panjang bagian yang lulus sekitar 125 mm, ditandai dengan pembagian 0,2 ml dari 0 hingga 25 ml ke arah atas.

Tambahkan 25 ml air dan kocok campuran secara menyeluruh setiap 10 menit selama 1 jam. biarkan selama 3 jam pada suhu kamar. Ukur volume dalam ml yang ditempati oleh bahan tanaman, termasuk lendir yang lengket. Hitung nilai rata-rata dari penentuan individu.

Penentuan Indeks Busa:

Bahan tanaman mengandung saponin yang dapat menyebabkan busa yang terus-menerus, ketika air rebusan dikocok.

Prosedur:

Timbang dengan teliti 1 gram bubuk kasar bahan tumbuhan dan pindahkan ke labu berbentuk kerucut 500 ml yang berisi 100 ml air mendidih. Pertahankan pada mendidih sedang selama 30 menit. Dinginkan dan saring ke dalam labu ukur 100 ml dan tambahkan air secukupnya melalui saringan untuk mengencerkan sampai tanda. Tuang hasil rebusan ke dalam 10 tabung reaksi bersumbat dalam porsi berturut-turut 1 ml, 2 ml, 3 ml, dst hingga 10 ml, dan sesuaikan volume cairan di setiap tabung dengan air hingga 10 ml. sumbat tabung dan kocok dengan gerakan memanjang selama 15 detik, dua getaran per detik.

Diamkan selama 15 menit dan ukur tinggi busa. Jika tinggi buih di setiap tabung kurang dari 1 cm, indeks pembusaan kurang dari 100. Jika tinggi busa 1 cm diukur di sembarang tabung, volume rebusan bahan tanaman di dalam tabung (a) digunakan untuk menentukan indeks.

Jika tabung ini adalah tabung pertama atau kedua dalam rangkaian, siapkan pengenceran antara dengan cara yang sama untuk mendapatkan hasil yang lebih akurat. Jika tinggi buih pada setiap tabung lebih dari 1 cm, indeks pembusaan lebih dari 1000 dalam hal ini ulangi penentuan dengan menggunakan rangkaian pengenceran baru dari rebusan untuk mendapatkan hasil.

Indeks Busa = 1000 / a

Dimana a = volume dalam ml dari rebusan yang digunakan untuk menyiapkan pengenceran dalam tabung dimana diamati busa setinggi 1 cm.

Penentuan Kontaminasi Mikroba:

1. Uji Salmonella:

Ambil 10 gram bahan bubuk dan buat volumenya menjadi 100 ml dengan kaldu laktosa. Campuran tersebut diinkubasi pada suhu 35-37°C selama 4 jam. Selanjutnya 10 ml sampel ini diambil. 100 ml kaldu empedu hijau cemerlang tetra metilen ditambahkan ke dalamnya dan diinkubasi pada suhu 37-40 ° C selama 24 jam. Sampel diambil sebanyak 1 ml dan ditanam pada media agar xylose lysine deoxyxcholate.

Agar deoxyxcholate citrate atau agar hijau brilian juga dapat digunakan. Ini diinkubasi pada 35 ° C selama 50 jam. Kecil transparan dan tidak berwarna dengan zona buram, merah muda (Dikelilingi zona merah muda hingga merah) menunjukkan adanya S. typhi.

Uji biokimia: Koloni yang diperoleh dari biakan di atas diperlakukan dengan antisera salmonella polivalen. Ini dikenal sebagai uji serotipe atau slide aglutinasi. Penampilan penggumpalan sel menegaskan keberadaan spesies salmonella.

1. Uji E. coli:

Suatu obat diuji keberadaan E. coli dengan mengambil 10 gram bahan bubuk dan membuat volumenya menjadi 100 ml dengan kaldu laktosa.

Campuran ini harus diinkubasi selama 4 jam pada suhu 35-37°C. 1 ml sampel diambil dan dibuat pengenceran serial dengan 9 ml kaldu MacConkey dengan konsentrasi 100 mg/ml, 10 mg/ml, 0,1 mg/ml dan 0,01 mg/ml. Sampel tesis diinkubasi pada suhu 37°C selama 18 jam. satu ml masing-masing diinkubasi pada media agar MacConkey, dan selanjutnya diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35-37°C pertumbuhan koloni batang gram negatif berwarna merah yang umumnya tidak mukoid menunjukkan adanya E. coli.

1. Uji Staphylococcus aureus:

Ambil 10 gram bahan bubuk dan buat volumenya menjadi 100 ml dengan kaldu NA. Campuran ini diinkubasi pada suhu 35-37°C selama 4 jam. Satu ml sampel ini dituang pada media agar Baird-Parker F, dan diinkubasi pada suhu 35-37°C selama 48 jam. Koloni gram +ve cocci berwarna hitam yang dikelilingi zona bening menunjukkan adanya Staphylococcus aureus.

Penentuan Tanin:

Tanin adalah zat yang mampu mengubah kulit hewan menjadi kulit dengan cara mengikat protein membentuk zat yang mengandung air yang tahan terhadap enzim proteolitik. Proses ini, ketika diterapkan pada jaringan hidup, dikenal sebagai tindakan “astringen” dan merupakan alasan untuk aplikasi terapeutik tanin.

Metode:

Timbang dengan teliti 10 gram bubuk tumbuhan halus ke dalam labu berbentuk kerucut. Tambahkan 150 ml air dan panaskan di atas penangas air mendidih selama 30 menit. Dinginkan, pindahkan campuran ke dalam labu takar 250 ml dan encerkan dengan air sampai tanda. Biarkan bahan padat mengendap dan saring cairan melalui kertas saring, diameter 12 cm, buang 50 ml filtrat pertama.

Untuk menentukan jumlah total bahan yang dapat diekstraksi ke dalam air, uapkan 50 ml ekstrak bahan tanaman hingga kering, keringkan residu dalam oven pada suhu 105°C selama 4 jam dan timbang (T ₁ ).

Untuk menentukan jumlah bahan tanaman yang tidak terikat, sembunyikan bubuk dan kocok dengan baik selama 60 menit. Saring dan uapkan 50 ml filtrat bening sampai kering. Keringkan residu dalam oven pada suhu 105°C dan timbang (T ₂ ).

Untuk menentukan kelarutan bubuk kulit, ambil 6 gram bubuk kulit, tambahkan 80 ml air dan kocok selama 60 menit. Saring dan uapkan 50 ml filtrat bening sampai kering. Keringkan residu dalam oven pada suhu 105°C dan timbang (T ₀ ).

Hitung jumlah tanin sebagai persentase menggunakan rumus berikut:

[T1 – (T2 – T0)] x 500 / b

Dimana w = berat bahan tanaman dalam gram.

Penentuan Residu Pestisida:

1. Penentuan klorida:

saya. Aparat:

Penentuan dilakukan dengan spektrofotometer yang mampu mengukur absorbansi pada 460 nm menggunakan sel serapan dengan panjang lintasan 2 cm dan 10 cm.

1. Prosedur:

Tempatkan 15 ml larutan yang diperoleh setelah pembakaran dalam labu berbentuk kerucut 50 ml bersama dengan 1 ml besi amonium sulfat (0,25 mol/l) dan 3 ml merkuri tiosianat. Aduk isi labu dan diamkan selama 10 menit. Pindahkan sebagian larutan ke sel 2 cm dan ukur absorbansi pada 460 nm menggunakan air dalam sel referensi. Pembacaan harus dilakukan segera untuk meminimalkan penyerapan klorida dari udara.

Siapkan larutan standar natrium klorida yang mengandung 5 hg klorida per ml. Pindahkan alikuot dari larutan ini (0 ml, 2 ml, 4 ml, 6 ml, 8 ml dan 10 ml) ke dalam serangkaian labu berbentuk kerucut 50 ml dan encerkan hingga 15 ml dengan air. Kembangkan warna dan ukur absorbansi seperti dijelaskan di atas. Plot absorbansi terhadap kandungan klorida dari pengenceran dalam per ml dan interpolasi kandungan klorida dari larutan bahan yang diuji.

2. Uji batas untuk arsenik:

saya. Aparat:

Peralatan terdiri dari botol 100 ml atau labu berbentuk kerucut yang ditutup dengan sumbat karet atau kaca tanah yang melewati tabung kaca. Bagian bawah tabung ditarik ke diameter internal 1,0 mm, dan 15 mm dari ujungnya adalah lubang lateral berdiameter 2 sampai 3 mm.

Ketika tabung dalam posisi di stopper lubang lateral harus minimal 3 mm di bawah permukaan bawah stopper. Ujung atas tabung memiliki permukaan yang rata sempurna dengan sudut siku-siku terhadap sumbu tabung.

Tabung gelas kedua dengan diameter dalam yang sama dan panjang 30 mm, dengan permukaan datar yang serupa, ditempatkan di pegas atau klip kontak. Ke dalam tabung bawah masukkan 50 sampai 60 mg kapas timbal asetat, dikemas secara longgar atau sumbat kapas kecil dan gulungan kertas asetat timbal seberat 50 sampai 60 mg. antara permukaan datar tabung tempatkan piringan atau Kotak Kecil kertas merkuri klorida yang cukup besar untuk menutupi lubang tabung.

1. Prosedur:

Larutan uji dimasukkan ke dalam botol atau labu berbentuk kerucut; tambahkan 5 ml kalium iodida 1 M dan 10 g Seng sebagai T. Segera rakit peralatan dan rendam labu dalam penangas air pada suhu sedemikian sehingga evolusi gas yang seragam dapat dipertahankan.

Setelah 40 menit noda apa pun yang dihasilkan pada kertas merkuri klorida tidak lebih kuat dari yang diperoleh dengan memperlakukan dengan cara yang sama 1,0 ml larutan standar arsenik (10 ppm as) diencerkan menjadi 50 ml dengan air.

3. Penentuan Logam Berat :

saya. Solusi standar:

Ke dalam pipet silinder Nessler 50 ml 1,0 ml larutan standar timbal (20 ppm Pb) dan encerkan dengan air hingga 25 ml. sesuaikan dengan asam asetat encer atau larutan amonia encer hingga pH antara 3,0 dan 4,0, encerkan dengan air hingga sekitar 35 ml dan campur.

1. Solusi uji:

Ke dalam tabung Nessler 50 ml, masukkan 25 ml larutan yang disiapkan untuk pengujian seperti yang tertera pada masing-masing monografi atau larutkan sejumlah zat yang diperiksa dalam air secukupnya untuk menghasilkan 25 ml. sesuaikan dengan asam asetat encer atau larutan amonia encer hingga pH antara 3 hingga 4 encerkan dengan air hingga sekitar 35 ml dan campur.

aku aku aku. Prosedur:

Pada masing-masing silinder yang berisi larutan standar dan larutan uji masing-masing tambahkan 10 ml larutan hidrogen sulfida yang baru dibuat, campur, encerkan hingga 50 ml dengan air, diamkan selama 5 menit dan lihat ke bawah di atas permukaan putih; warna yang dihasilkan dengan larutan uji tidak lebih pekat daripada yang dihasilkan dengan larutan standar.