Tes imunohistokimia banyak digunakan untuk mendeteksi antigen tumor dan untuk mengklasifikasikan jenis sel limfosit pada bagian patologi bedah.
Spesimen jaringan difiksasi pada slide kaca.
sebuah†”
Enzim berlabel mAb (konjugat) dilapisi di atas spesimen dan diinkubasi.
saya. Jika spesimen memiliki antigen spesifik terhadap mAb, konjugat berikatan dengan antigen pada spesimen.
sebuah†”
Setelah dicuci, substrat ditambahkan dan diinkubasi.
saya. Perkembangan warna menunjukkan bahwa, antigen spesifik terhadap mAb hadir di bagian jaringan.
- Dengan tidak adanya antigen spesifik, tidak ada perkembangan warna.
sebuah†”
Slide dicuci dan bagian jaringan dilihat di bawah mikroskop untuk melihat adanya warna.
Horseradish peroxidase (HRP) adalah enzim yang biasa digunakan dalam teknik imunohistokimia. Substrat untuk HRP adalah hidrogen peroksida dan diaminobenzidine. Reaksi HRP dengan diaminobenzidin menghasilkan warna hitam.
Peroksidase-antiperoksidase (PAP) adalah metode lain yang digunakan dalam patologi bedah untuk mendeteksi enzim dan antigen terkait tumor.
Ini adalah metode tiga langkah:
Langkah 1:
Jaringan yang dicurigai memiliki antigen tertentu difiksasi pada slide kaca.
sebuah†”
Antibodi kelinci yang diketahui terhadap antigen tersebut diteteskan pada jaringan (diduga memiliki antigen) yang ditempelkan pada slide kaca.
saya. Jika antigen yang sesuai kebetulan berada di jaringan, antibodi mengikatnya. Slide dicuci setelah inkubasi.
sebuah†”
Langkah 2:
Imunoglobulin anti-kelinci (disebut antibodi tautan) dijatuhkan pada slide.
saya. Jika antibodi kelinci pertama kebetulan ada di slide (terikat dengan antigen), imunoglobulin anti-kelinci berikatan dengan antibodi kelinci. Setelah inkubasi slide dicuci.
sebuah†”
Langkah 3:
Kompleks imun, yang terdiri dari antibodi kelinci terhadap peroksidase, dikombinasikan dengan peroksidase, dijatuhkan. Antibodi kelinci ini akan berikatan dengan imunoglobin anti-kelinci (tautan antibodi-langkah 2) melalui wilayah Fc-nya. Setelah inkubasi slide dicuci.
sebuah†”
Akhirnya, substrat peroksidase ditambahkan. Substrat akan bereaksi dengan peroksidase menghasilkan pembentukan produk berwarna yang dilihat di bawah mikroskop.
saya. Kehadiran produk berwarna pada jaringan menunjukkan adanya antigen yang sesuai.
- Tidak adanya produk berwarna pada slide menunjukkan bahwa antigen tersebut tidak ada dalam jaringan.
