Baca artikel ini untuk mempelajari tentang tes metil merah (uji MR), untuk mengetahui kemampuan bakteri memanfaatkan glukosa dengan produksi asam stabil sebagai produk akhir!
Prinsip:
Beberapa bakteri memiliki kemampuan untuk memanfaatkan glukosa dan mengubahnya menjadi asam yang stabil seperti asam laktat, asam asetat atau asam format sebagai produk akhir.
Bakteri ini awalnya memetabolisme glukosa menjadi asam piruvat, yang selanjutnya dimetabolisme melalui jalur asam campuran untuk menghasilkan asam yang stabil.
Jenis asam yang dihasilkan berbeda dari spesies ke spesies dan bergantung pada jalur enzimatik spesifik yang ada pada bakteri. Asam yang dihasilkan menurunkan pH menjadi 4,5 atau lebih rendah, yang ditunjukkan dengan perubahan warna metil merah dari kuning menjadi merah.
Pada uji metil merah (uji MR), bakteri uji ditumbuhkan dalam media kaldu yang mengandung glukosa. Jika bakteri memiliki kemampuan untuk memanfaatkan glukosa dengan produksi asam yang stabil, warna merah metil berubah dari kuning menjadi merah, bila ditambahkan ke dalam biakan kaldu.
Bahan yang Dibutuhkan:
Tabung reaksi, labu berbentuk kerucut, sumbat kapas, loop inokulasi, autoklaf, pembakar bunsen, ruang aliran laminar, tabung pembuangan, inkubator, kaldu MR-VP (kaldu Proskauer metil merah-Voges atau kaldu glukosa fosfat), larutan metil merah, koloni terisolasi atau kultur murni bakteri.
Prosedur:
- Bahan media kaldu MR-VP (mengandung glukosa sebagai komponen utama) atau bubuk siap pakai yang dibutuhkan untuk 100 ml kaldu ditimbang dan dilarutkan dalam 100 ml air suling dalam labu berbentuk kerucut 250 ml dengan cara dikocok dan berputar-putar. Kaldu MR-VP juga disebut kaldu glukosa fosfat (Gambar 7.4).
- Ditentukan pH-nya menggunakan kertas pH atau pH meter dan diatur menjadi 6,9 menggunakan HCI 0,1N jika lebih banyak atau menggunakan NaOH 0,1N jika kurang. Labu dipanaskan, jika perlu, untuk melarutkan bahan sepenuhnya.
- Kaldu didistribusikan ke dalam lima tabung reaksi (masing-masing kurang lebih 10 ml), ditutup dengan kapas, ditutup dengan kertas kerajinan dan diikat dengan benang atau karet gelang.
- Tabung kaldu disterilkan pada suhu 121°C (tekanan 15 psi) selama 15 menit dalam autoklaf.
- Tabung kaldu dibiarkan dingin hingga suhu kamar.
- Bakteri uji diinokulasi secara aseptis, sebaiknya dalam ruang aliran laminar, ke dalam kaldu dengan bantuan loop inokulasi yang disterilkan di atas api bunsen. Loop disterilkan setelah setiap inokulasi.
- Tabung kaldu yang telah diinokulasi diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 sampai 48 jam dalam inkubator.
- Larutan alkohol metil merah (3-4 tetes) diteteskan ke dalam masing-masing tabung reaksi.
Pengamatan:
- Warna merah yang dihasilkan: MR positif (yaitu bakteri telah mengubah glukosa menjadi asam yang stabil, yang ditunjukkan dengan konversi metil merah dari warna kuning menjadi merah. Ini menunjukkan fermentasi asam campuran).
- Warna merah tidak dihasilkan: MR negatif (yaitu glukosa dalam medium belum diubah menjadi asam yang stabil. Hal ini menunjukkan fermentasi butilen glikol).
