Uji Pelengkap Antigen dan Antibodi | Imunologi



Uji Pelengkap Antigen dan Antibodi!

Metode untuk penentuan yang akurat dari masing-masing komponen komplemen dari ketiga jalur aktivasi komplemen dan beberapa enzim dan pengatur sistem komplemen telah tersedia.

Namun, banyak tes hanya tersedia di laboratorium penelitian.

Ada dua jenis uji komplemen:

  1. Tes yang mengukur protein komplemen sebagai antigen.
  2. Tes yang mengukur aktivitas fungsional komplemen.

Tes yang mengukur protein komplemen sebagai antigen umumnya mudah dilakukan, murah, memakan waktu lebih sedikit, dan dapat dilakukan di banyak laboratorium. Tetapi tes antigenik ini tidak memberikan informasi tentang kemampuan fungsional komponen komplemen karena tes antigen komplemen ini mendeteksi baik komponen komplemen yang aktif secara fungsional maupun produk degradasi komplemen.

saya. Umumnya, tes antigenik tidak sesensitif tes fungsional.

  1. Tes antigenik tidak mendeteksi ­komponen pelengkap tingkat rendah dalam cairan tubuh tertentu.

aku aku aku. Tes ELISA tersedia untuk pengukuran produk split komponen komplemen atau kompleks yang terbentuk selama aktivasi komplemen.

  1. Aktivasi komplemen melalui jalur klasik dapat diukur dengan mengikuti kadar C4d dan C4 dalam serum.
  2. Pengukuran ELISA kompleks C1r-C1s-C1INH memberikan ukuran aktivasi komplemen melalui jalur klasik.
  3. Aktivasi jalur alternatif dapat diukur dengan metode ELISA dengan menilai kadar kompleks Bb atau C3bBbP dalam sirkulasi.
  4. Aktivasi jalur klasik atau alternatif dapat dipantau dengan mengukur kadar iC3b atau kompleks serangan membran bentuk larut sC5b6789.

viii. Kit ELISA untuk mengukur anaphylotaxin C3a dan C5a dalam serum atau plasma tersedia.

Penanganan Sampel untuk Uji Pelengkap:

Penanganan sampel yang tepat sangat penting untuk melengkapi pengujian fungsional. Beberapa komponen pelengkap sangat labil.

saya. Untuk sebagian besar pemeriksaan fungsional, serum lebih disukai daripada plasma karena pengkhelat kalsium (seperti EDTA, heparin) yang digunakan untuk mendapatkan plasma mungkin bersifat antikomplementer ­.

  1. Untuk tes fungsional, darah harus menggumpal pada suhu kamar selama 30-60 menit dan kemudian di atas es selama setidaknya satu jam.

aku aku aku. Untuk tes pengikatan Clq, darah harus menggumpal selama 2 jam pada suhu kamar. Gumpalan tersebut dibingkai dan disentrifugasi pada 0°C hingga 4°C selama lima menit. Jika antibodi cryoprecipitating dicurigai, pembentukan gumpalan dan sentrifugasi darah harus dilakukan pada suhu 37°C karena fiksasi komplemen dapat terjadi jika spesimen didinginkan.

  1. Sampel serum atau plasma harus dicairkan dalam beberapa volume kecil dan segera disimpan pada suhu 40 hingga -80°C.
  2. Saat sera dipindahkan, sera harus disegel dengan baik dan ditempatkan dalam wadah dengan es kering dalam jumlah besar.

Melengkapi Tes Fungsional:

Buffer yang digunakan dalam pengujian fungsional komplemen sangat penting karena perubahan molaritas dan konsentrasi ion logam dapat mempengaruhi nilai titer komplemen. Uji CH 50 untuk jalur komplemen klasik: Uji fungsional paling sederhana dari jalur klasik mengukur komplemen hemolitik total.

Ketiadaan salah satu komponen komplemen menghasilkan total titer komplemen hemolitik (CH 50 ) nol. Eritrosit domba umumnya digunakan sebagai sel target untuk mengukur CH 50 atau aktivitas fungsional komponen komplemen yang diisolasi. Sel darah merah domba lebih sensitif terhadap antibodi dan lisis yang dimediasi komplemen daripada sel darah merah dari spesies lain.

AH 50 untuk jalur komplemen alternatif:

Eritrosit kelinci digunakan untuk mengukur AH 50 . Sel darah merah kelinci sensitif terhadap lisis independen antibodi yang dimediasi oleh serum manusia.

saya. Tes CH 50 dan AH 50 adalah tes skrining yang sangat baik untuk menyingkirkan defisiensi genetik komponen komplemen.

  1. Aktivitas CH 50 normal dengan penurunan nilai AH 50 dihasilkan dari defek pada jalur komplemen alternatif.

aku aku aku. Defisiensi pada komponen pelengkap terminal mengakibatkan hilangnya aktivitas CH 50 dan AH 50 .

  1. Defisiensi komponen komplemen homozigot benar-benar membatalkan uji hemolitik.

Derajat hemolisis dipengaruhi oleh banyak faktor, seperti konsentrasi eritrosit, kerapuhan (usia) eritrosit, jumlah antibodi yang digunakan untuk sensitisasi ­, sifat antibodi (IgG atau IgM), kekuatan ion sistem buffer, P H , waktu reaksi, suhu, dan konsentrasi kalsium 2+ atau magnesium 2+ . Nilai satuan CH50 dalam serum manusia dihitung dengan beberapa cara, seperti persamaan Von krough.

Pengukuran defisiensi fungsional komponen komplemen individu:

Ketika riwayat dan gejala pasien menunjukkan kemungkinan defisiensi komponen komplemen, titrasi hemolitik dari masing-masing komponen mungkin diperlukan. Untuk menghasilkan lisis eritrosit, diperlukan kehadiran dan aktivasi seluruh komponen komplemen (C1 – C9). Jika salah satu komponen tidak ada, hemolisis tidak terjadi. Sediaan murni dari masing-masing komponen komplemen diperlukan untuk mendeteksi tidak adanya komponen komplemen tertentu dalam serum atau plasma pasien.

Untuk mengukur komponen komplemen individual, diperlukan komponen yang dimurnikan sebagian. Namun, pengukuran C4 merupakan pengecualian, karena ketersediaan serum babi guinea yang kekurangan C4 (C4D). Sera dari manusia defisien C2 dan babi guinea serta kelinci defisien C6 tersedia di beberapa laboratorium.

Assay komplemen fungsional dari masing-masing komponen ­bersifat sensitif dan memberikan informasi yang akurat tentang aktivitas komponen komplemen. Tetapi sebagian besar tes ini terbatas pada laboratorium penelitian.

Pengukuran Komponen Pelengkap Individu dengan Analisis Antigen:

Difusi imun radial tunggal adalah metode yang paling umum untuk menghitung komponen komplemen, seperti C3, C4, dan faktor B. Perlu diingat bahwa semua pemeriksaan fungsional komplemen dapat dihambat oleh aksi antikomplementer serum (yang mungkin dihasilkan dari antigen- kompleks antibodi, heparin, agen pengkhelat, dan gabungan imunoglobulin).

Tes Fiksasi Komplemen:

Ketika ada interaksi antigen-antibodi, ­komponen pelengkap diaktifkan dan dikonsumsi. Oleh karena itu konsumsi uji in vitro komplemen menunjukkan adanya interaksi antigen-antibodi. Prinsip ini digunakan untuk mendeteksi dan mengukur antigen atau antibodi dalam uji fiksasi komplemen.

Tes dilakukan dalam dua tahap. Pada tahap pertama, interaksi antigen-antibodi terjadi dan komplemen dikonsumsi. Pada tahap kedua, sistem indikator digunakan untuk mendeteksi apakah komplemen dikonsumsi atau tidak pada reaksi tahap pertama.

saya. Jika komplemen dikonsumsi pada tahap pertama, berarti reaksi antigen-antibodi telah terjadi pada tahap pertama.

  1. Jika komplemen tidak dikonsumsi, berarti tidak ada interaksi antigen-antibodi pada tahap pertama.

Deteksi Antibodi dengan Uji Fiksasi Pelengkap:

Tahap pertama:

Konsentrasi tetap dari antigen dan komplemen yang diketahui (biasanya serum babi guinea segar digunakan sebagai sumber komplemen) diambil. Serum yang mengandung (antibodi yang tidak diketahui) ditambahkan dan diinkubasi.

  1. Antigen + komplemen + serum yang diketahui (sesuai dengan keberadaan ­antibodi). Komplemen dikonsumsi selama inkubasi.
  2. Antigen + komplemen -1- serum yang diketahui (karena ­tidak ada antibodi ponding). Komplemen tidak dikonsumsi karena serum tidak mengandung antibodi yang spesifik terhadap antigen yang diketahui.

Tahap Kedua:

Eritrosit domba yang dilapisi dengan antibodi eritrosit anti-domba kelinci ditambahkan ke dalam tabung. Dengan adanya komplemen, eritrosit domba akan mengalami lisis (hemolisis). Tanpa komplemen, eritrosit tidak akan melisis (tidak ada hemolisis).

  1. Karena komplemen digunakan selama reaksi tahap pertama, eritrosit domba yang dilapisi antibodi tidak dilisiskan. Oleh karena itu tidak adanya hemolisis menunjukkan bahwa serum mengandung antibodi spesifik terhadap antigen yang digunakan dalam tes.
  2. Karena komplemen tidak digunakan pada tahap pertama, eritrosit domba yang dilapisi antibodi mengalami hemolisis oleh komplemen pada tahap kedua. Oleh karena itu, adanya hemolisis menunjukkan bahwa serum tidak mengandung antibodi spesifik terhadap antigen yang digunakan.

Tes fiksasi komplemen banyak digunakan di laboratorium klinis dan penelitian. Virus, antibodi serum terhadap infeksi virus, antibodi terhadap Treponema pallidum yang menyebabkan sifilis, antibodi anti-jamur (Coccidioidomycosis immitis, Histoplasma capsulatum), antibodi anti-Mycoplasma pneumoniae, dan antibodi anti-ricketsial dideteksi dengan uji fiksasi komplemen.

Related Posts