Uji Reduksi Nitrat pada Bakteri untuk Mengetahui Kemampuan Reduksi Nitrat

Baca artikel ini untuk mempelajari kinerja uji reduksi nitrat pada bakteri untuk mengetahui kemampuannya mereduksi nitrat!

Prinsip:

Beberapa bakteri memiliki kemampuan mereduksi nitrat, karena dapat menghasilkan enzim ‘nitrat reduktase’.

Enzim ini, dengan adanya donor elektron yang sesuai, mereduksi nitrat (N0 ₃ ^– ) menjadi nitrit (N0 ₂ ^– ). Adanya N0 ₂ ^– ditunjukkan dengan adanya asam sulfanilat dan a-naftilamina yang berubah warna menjadi merah.

Pada uji reduksi nitrat, bakteri uji ditumbuhkan dalam media kaldu yang mengandung nitrat (N0 ₃ ^– ). Jika bakteri memiliki kemampuan untuk mereduksi nitrat, kaldu akan berwarna merah setelah penambahan asam sulfanilat dan a-naftilamina.

Jika warna merah tidak dihasilkan, ini menunjukkan bahwa N0 ₃ ^– tidak direduksi oleh bakteri sama sekali atau bakteri menghasilkan enzim reduktase nitrat yang sangat kuat, yang dengan cepat mereduksi N0 ₃ ^– melebihi N0 ₂ ^– menjadi NH ₃ dan N ₂ . Untuk memastikan hal ini, sejumlah kecil debu seng ditambahkan, yang mereduksi NO3- _, ^jika tersedia dalam medium, menjadi N02- _, ^sehingga menghasilkan warna merah.

Jadi, jika warna merah dihasilkan, itu menunjukkan bahwa N0 ₃ ^– hadir dalam media tidak berubah dan bakteri tidak memiliki kemampuan mereduksi nitrat. Jika warna merah tidak dihasilkan, ini menunjukkan bahwa N0 ₃ ^– telah tereduksi melebihi N0 ₂ ^– menjadi NH ₃ dan N ₂ dan bakteri memiliki kemampuan untuk mereduksi nitrat.

Bahan yang Dibutuhkan:

Tabung reaksi, labu berbentuk kerucut, sumbat kapas, loop inokulasi, autoklaf, pembakar bunsen, ruang aliran laminar, tabung pembuangan, inkubator, kaldu nitrat, debu seng, reagen nitrat Larutan A, reagen nitrat Larutan B, koloni terisolasi atau biakan murni bakteri.

Prosedur:

1. Bahan media kaldu nitrat (mengandung nitrat sebagai komponen utama) atau bubuk siap pakai yang diperlukan untuk 100 ml kaldu ditimbang dan dilarutkan dalam 100 ml air suling dalam labu berbentuk kerucut 250 ml dengan cara dikocok dan diaduk ( Gambar 7.10).

2. Ditentukan pH-nya menggunakan kertas pH atau pH meter dan diatur menjadi 7,2 menggunakan HCI 0,1N jika lebih atau menggunakan NaOH 0,1N jika kurang. Labu dipanaskan, jika perlu, untuk melarutkan bahan sepenuhnya.
3. Kaldu didistribusikan ke dalam lima tabung reaksi (masing-masing kurang lebih 10 ml), ditutup dengan kapas, ditutup dengan kertas kerajinan dan diikat dengan benang atau karet gelang.
4. Tabung kaldu disterilkan pada suhu 121 °C (tekanan 15 psi) selama 15 menit dalam autoklaf.
5. Tabung kaldu dibiarkan dingin hingga suhu kamar.
6. Bakteri uji diinokulasi secara aseptik, sebaiknya dalam ruang aliran laminar, ke dalam kaldu dengan bantuan loop inokulasi yang disterilkan di atas api bunsen. Loop disterilkan setelah setiap inokulasi.
7. Tabung kaldu yang telah diinokulasi diinkubasi pada suhu 37°C selama 48 jam dalam inkubator.
8. 0,5 ml masing-masing Larutan reagen nitrat A (mengandung asam sulfanilat) dan reagen nitrat Larutan B (mengandung a-naftilamina) ditambahkan ke dalam masing-masing tabung reaksi, dikocok dengan baik dan diamati perubahan warna setelah 15 menit.

Pengamatan:

1. Warna merah yang dihasilkan: Reduksi nitrat positif.
2. Warna merah tidak dihasilkan: Debu seng ditambahkan.

(sebuah) Warna merah yang dihasilkan: Pengurangan nitrat negatif.

(b) Warna merah tidak dihasilkan: Pengurangan nitrat positif.