DNA
Asam deoksiribonukleat dan protein. DNA disusun menjadi unit-unit yang disebut gen, yang masing-masing mengkode RNA atau urutan protein tertentu. Gen dipelajari untuk mempelajari tentang struktur dan fungsi biologis, evolusi, penyakit, dan banyak aspek lain dari sistem kehidupan. Untuk mempelajari gen secara detail, DNA harus diisolasi dan dimurnikan dari sel yang diinginkan.
Ekstraksi DNA
Meskipun DNA dari satu sel dapat diekstraksi dan dipelajari, itu tidak cukup untuk dilihat dengan mata telanjang. Untuk mendapatkan jumlah yang cukup untuk spooling, semakin banyak sel Anda harus bekerja dengan lebih baik (jutaan).
Protokol yang tepat sangat bervariasi untuk memperhitungkan karakteristik unik dari sampel tertentu, tetapi langkah umumnya adalah homogenisasi, lisis, pencernaan, pemisahan, dan pengumpulan. Prosedur ini paling baik dilakukan dalam tabung kaca atau plastik kecil (tergantung pada ukuran sampel).
Sampel umumnya dicampur atau ditumbuk untuk memisahkan sel satu sama lain secara menyeluruh. Ini membuat bahan sel lebih mudah diakses oleh reagen berikutnya. Detergen atau enzim kemudian ditambahkan ke homogenat untuk melisiskan membran sel (dan membran inti jika sel eukariotik) untuk membebaskan DNA. Pada titik ini, DNA dikelilingi oleh protein, lipid, karbohidrat — segala sesuatu yang terkandung dalam sel.
Pencernaan enzimatik lebih lanjut mungkin diperlukan untuk memecah protein sehingga tidak mengikat DNA dan mengganggu pengumpulannya. DNA dipisahkan dari sisa isi sel dengan menambahkan alkohol dingin, murni, etil atau isopropil. DNA tidak larut dalam alkohol ini sehingga akan memadat untuk meminimalkan kontaknya dengan alkohol. DNA kental kemudian dikumpulkan, biasanya dengan sentrifugasi — atau spooling.
Pengumpulan DNA
Pengumpulan DNA dengan spooling efektif ketika sejumlah besar DNA diperoleh dari prosedur ekstraksi. Ini juga merupakan metode demonstrasi yang sangat baik karena jalinan DNA murni yang mengesankan terlihat jelas.
Untuk menggulung DNA langkah pemisahan harus dilakukan dengan hati-hati. Jika itu bukan bagian dari campuran reagen lisis yang ditambahkan sebelumnya, larutan garam pekat (natrium klorida) harus ditambahkan ke larutan sebelum langkah penambahan alkohol. Alkohol dingin dituangkan perlahan ke sisi tabung reaksi untuk membentuk lapisan di atas larutan berair, menghindari pencampuran. Jika dilakukan dengan benar, alkohol akan membentuk lapisannya sendiri di atas lapisan asin. Lalu datanglah spooling.
Untuk mengumpulkan DNA dari lapisan asin, hati-hati tempatkan batang pengaduk kaca melalui lapisan alkohol sampai menyentuh bagian bawah tabung. Putar batang secara perlahan di antara jari-jari, sambil mengamati antarmuka antara dua lapisan. Jika cukup DNA hadir, itu akan menggumpal di antarmuka antara lapisan untuk membentuk massa tembus susu. Putar batang untuk membungkus DNA di sekitarnya (yaitu bagian spooling) dan tarik keluar dari tabung. DNA dapat dipindahkan ke tabung lain berisi alkohol murni untuk disimpan atau dianalisis lebih lanjut.
Model Molekul DNA (Wikimedia Commons)
