Baca artikel ini untuk mempelajari tentang uji Voges-Proskauer (uji VP) pada bakteri untuk mengetahui kemampuannya memanfaatkan glukosa dengan produksi asetilmetilkarbinol!
Prinsip:
Beberapa bakteri memiliki kemampuan untuk memanfaatkan glukosa dan mengubahnya menjadi asetilmetilkarbinol (asetoin), yang merupakan produk akhir yang netral.
Bakteri ini awalnya memetabolisme glukosa menjadi asam piruvat, yang selanjutnya dimetabolisme melalui metabolisme asam asetat antara menjadi asetilmetilkarbinol (asetoin) dan C0 2 melalui ‘jalur butilen glikol’.
Acetylmethylcarbinol dioksidasi menjadi diacetyl dengan adanya a-naftol dalam kondisi basa (40 persen KOH). Diacetyl bereaksi dengan kelompok guanidine creatine (dari pepton yang digunakan dalam media kultur) untuk menghasilkan warna merah jambu.
Pada uji Voges-Proskauer (uji VP), bakteri uji ditumbuhkan dalam media kaldu yang mengandung glukosa. Jika bakteri memiliki kemampuan untuk memanfaatkan glukosa dengan produksi asetilmetilkarbinol (asetoin) sebagai produk akhir yang netral, kaldu memperoleh warna merah jambu setelah penambahan larutan a-naftol diikuti dengan 40% KOH.
Bahan yang Dibutuhkan:
Tabung reaksi, labu berbentuk kerucut, sumbat kapas, loop inokulasi, autoklaf, pembakar bunsen, ruang aliran laminar, tabung pembuangan, inkubator, kaldu MR-VP (atau kaldu glukosa fosfat), larutan VP I (larutan reagen Barritt A) dan larutan VP II (Larutan reagen Barritt B), koloni terisolasi atau biakan murni bakteri.
Prosedur:
- Bahan media kaldu MR-VP (mengandung glukosa sebagai komponen utama) atau bubuk siap pakai yang dibutuhkan untuk 100 ml kaldu ditimbang dan dilarutkan dalam 100 ml air suling dalam labu berbentuk kerucut 250 ml dengan cara dikocok dan berputar-putar (Gambar 7.5). Kaldu yang digunakan untuk tes metil merah juga bisa digunakan di sini. Biasanya kaldu yang sama digunakan untuk kedua tes (MR dan VP) secara bersamaan.
- Ditentukan pH-nya menggunakan kertas pH atau pH meter dan diatur menjadi 6,9 menggunakan HCI 0,1N jika lebih banyak atau menggunakan NaOH 0,1N jika kurang. Labu dipanaskan, jika perlu, untuk melarutkan bahan sepenuhnya.
- Kaldu didistribusikan ke dalam lima tabung reaksi (masing-masing kurang lebih 10 ml), ditutup dengan kapas, ditutup dengan kertas kerajinan dan diikat dengan benang atau karet gelang.
- Tabung kaldu disterilkan pada suhu 121°C (tekanan 15 psi) selama 15 menit dalam autoklaf.
- Tabung kaldu dibiarkan dingin hingga suhu kamar.
- Bakteri uji diinokulasi secara aseptik, sebaiknya dalam ruang aliran laminar, ke dalam kaldu dengan bantuan loop inokulasi yang disterilkan di atas api bunsen. Loop disterilkan setelah setiap inokulasi.
- Tabung kaldu yang telah diinokulasi diinkubasi pada suhu 37°C selama 48 sampai 72 jam dalam inkubator.
- Larutan VP I (mengandung α-naftol) diteteskan ke dalam tabung kaldu (masing-masing 0,2 ml) dan diaduk rata.
- Larutan VP II (mengandung KOH) diteteskan ke dalam tabung kaldu (masing-masing 0,6 ml), diaduk rata dan didiamkan selama 30 menit sampai 2 jam.
Pengamatan:
- Warna rose pink yang dihasilkan: VP positif.
- Warna rose pink tidak dihasilkan: VP negatif.
