Pada artikel ini kita akan membahas tentang Fluorescent in Situ Hybridization (FISH).
Ini adalah teknik laboratorium yang digunakan untuk menentukan berapa banyak salinan segmen DNA tertentu yang ada dalam sel. Ini mengidentifikasi wilayah kromosom tertentu dalam persiapan sitologi . Di laboratorium, suatu segmen DNA dimodifikasi secara kimiawi atau diwarnai dengan pewarna fluoresen dan ketika diperiksa di bawah mikroskop fluoresen tampak berwarna sangat terang berpendar.
Hibridisasi fluoresensi in situ telah sangat meningkatkan sensitivitas, spesifisitas, dan resolusi analisis kromosom.
Keuntungan dari teknik ini banyak tetapi beberapa disebutkan sebagai berikut:
(1) Resolusi metode ini jauh lebih baik daripada pita kromosom tradisional dan panjangnya sekitar 2 mega-basa (Mb).
(2) Protokol teknik ini mudah dan dapat diterapkan baik untuk sel yang membelah maupun sel yang tidak membelah. Teknik ini dapat mengidentifikasi berbagai mutasi termasuk penghapusan, duplikasi, aneuploidi, dan keberadaan kromosom turunan. Teknik ini juga biasa digunakan untuk memantau penyakit rekuren atau residual pada pasien transplantasi sumsum tulang.
FISH (Fluorescent In Situ Hybridization) umumnya dilakukan pada darah perifer terstimulasi untuk analisis kromosom dan identifikasi translokasi dan delesi spesifik. Misalnya, digunakan untuk menunjukkan kromosom Philadelphia (Ph 1 ) yang dibentuk oleh translokasi antara kromosom 9 dan 22 dan menyebabkan leukemia myelogenous kronis (CML).
Ini juga digunakan dalam identifikasi translokasi antara kromosom 8 dan 14 yang menyebabkan limfoma Burkitt dan antara kromosom 18 dan 14 yang menyebabkan leukemia sel-B. Ini juga digunakan untuk diagnosis Sindrom Down.
Dalam prosedur FISH, kultur sel dapat disiapkan. Kromosom metafase/prometafase dipasang pada slide kaca. Selain itu, FISH dapat dimodifikasi untuk analisis inti interfase. Kemudian, kromosom didenaturasi; probe DNA berlabel kemudian diperkenalkan dan kemudian probe hibridisasi ke kromosom pada slide. Oleh karena itu, diberikan istilah hibridisasi ‘in situ’.
Probe DNA diberi label dengan fluorochrome, probe tersebut memberikan sinyal fluoresen dan dapat dilihat dengan mikroskop fluoresensi. Fluoresensi dapat dikurangi dengan bantuan filter yang dipasang di mikroskop fluoresen.
Probe FISH memiliki panjang sekitar 40 kilo basa (kb), dan terdeteksi sebagai sinyal fluoresen ganda pada setiap anggota pasangan kromosom. Titik ganda sesuai dengan sinyal dari masing-masing dari dua kromatid saudara perempuan yang selaras.
Dalam penerapannya yang sederhana, pola FISH normal untuk penyelidikan semacam itu akan menjadi dua set titik ganda, satu set untuk setiap anggota kromosom yang biasanya dipasangkan. Titik ganda ini sering menyatu untuk membentuk satu sinyal. Sel monosomik untuk wilayah kromosom yang bersangkutan hanya akan menunjukkan satu set titik ganda per nukleus, sedangkan sel trisomik akan menunjukkan tiga set titik ganda.
