Catatan Berguna tentang Elektroforesis!
Makromolekul biologis membawa gugus bermuatan dan oleh karena itu molekul dalam larutan membawa muatan listrik bersih (kecuali pada titik isoelektrik). Jika dua elektroda ditempatkan dalam larutan semacam ini dan medan listrik diterapkan, molekul bermuatan positif bergerak menuju katoda, sedangkan molekul bermuatan negatif bergerak menuju anoda.
Gambar Courtesy: upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/7/78/Gel_electrophoresis_-_2.jpg
Laju pergerakan molekul bergantung pada besaran dan juga tanda muatan. Molekul dengan muatan ganda akan bergerak dua kali kecepatan molekul dengan muatan tunggal. Perbedaan ini memberikan dasar pemisahan berbagai jenis protein dalam larutan.
Pada awalnya (Tiselius, 1937), protein dibiarkan bergerak bebas dalam larutan dan elektroforesis dilakukan dalam tabung-U (Gbr. 6). Saat ini elektroforesis biasanya dilakukan dalam media pendukung berupa kertas atau gel. Ini mencegah difusi cepat dan mempertahankan pita yang sangat tajam setelah pemisahan.
Dalam elektroforesis kertas, setetes kecil larutan protein ditempatkan di salah satu ujung kertas dan medan listrik kemudian diterapkan, menggunakan larutan garam atau buffer antara untuk membuat kontak antara elektroda dan kertas. Sepotong kertas serap, yang digunakan untuk campuran protein, ditempatkan di antara dua cawan yang berisi larutan konduksi yang sesuai. Ketika arus dinyalakan, protein bermigrasi ke salah satu elektroda.
Jika bermuatan positif, mereka bermigrasi ke elektroda negatif (katoda); jika bermuatan negatif, mereka bermigrasi ke elektroda positif (anoda). Muatan pada protein bergantung pada pH larutan penghantar. Jadi elektroforesis telah digunakan untuk mengisolasi banyak protein penting termasuk gamma globulin, protein dalam darah yang memberi kita kekebalan terhadap penyakit.
Dalam elektroforesis gel, gel dikemas dalam tabung vertikal, dan setetes protein atau sampel diletakkan di atas gel. Fraksi protein dikumpulkan di outlet elusi. Pemisahan protein yang sangat baik dapat dicapai dengan menggunakan gel aerilamid.
Pada titik isoelektrik, protein tidak membawa muatan bersih. Jika gradien pH ditetapkan alih-alih gradien densitas, protein menjadi terkonsentrasi di pita, di mana mereka diam pada pH tertentu.
Ini dikenal sebagai pemfokusan isoelektrik (Svenssson, 1961). Baru-baru ini elektroforesis telah diterapkan untuk mempelajari sel utuh. Suspensi sel ditempatkan dalam tabung dan medan listrik diterapkan. Kecepatan sel dapat diukur dengan pengamatan langsung menggunakan graticule.
Pengukuran jenis ini telah membantu dalam memahami struktur permukaan membran plasma sel (James, 1956, Forrester, 1962, Ruhenstroth, 1962).
