Bereksperimen untuk Membudidayakan dan Mengidentifikasi Jamur!
Komponen struktural sebagian besar jamur, terutama cetakan berfilamen, sangat halus.
Penanganan sederhana dengan loop inokulasi dapat menyebabkan gangguan mekanis pada strukturnya. Oleh karena itu, teknik mikro khusus digunakan untuk mengolahnya untuk identifikasi. Media nutrisi yang disterilkan dengan pH asam seperti media agar Sabouraud, yang cocok untuk pertumbuhan jamur dituangkan ke dalam rongga slide dan ditutup dengan kaca penutup.
Jamur dari biakan stok diinokulasikan secara aseptis pada permukaan media pada slide dan diinkubasi dalam ruang lembab pada suhu kamar. Setelah masa inkubasi yang sesuai, morfologi koloni mereka diamati dengan mata telanjang atau jika diperlukan menggunakan lensa tangan.
Untuk mengamati kenampakan mikroskopis, sediaan basah jamur yang tumbuh dibuat dengan menggunakan larutan biru kapas laktofenol dan dilihat di bawah pembesaran daya rendah dan daya tinggi dari mikroskop bedah (mikroskop sederhana). Jamur tersebut kemudian diidentifikasi menggunakan morfologi kolonial dan penampilan mikroskopisnya. Karakteristik pengidentifikasian beberapa jamur diberikan pada Gambar 10.2 sampai 10.4.
Bahan yang Dibutuhkan:
Cawan petri, kertas saring berbentuk lingkaran, batang kaca berbentuk U, slide rongga, slip penutup, labu berbentuk kerucut, gelas kimia, pipet, etanol (95%), forsep, pembakar bunsen, tusuk gigi, petroleum jelly, sumbat kapas, loop inokulasi, Autoklaf agar Sabouraud, pembakar bunsen, biakan stok jamur yang akan dibudidayakan dan diidentifikasi, ruang aliran laminar, tabung pembuangan, inkubator, larutan biru kapas laktofenol, mikroskop sederhana.
Prosedur:
- Bahan media agar Sabouraud atau bubuk siap pakainya, diperlukan sebanyak 100 ml media ditimbang dan dilarutkan dalam 100 ml air suling dalam labu berbentuk kerucut 250 ml dengan cara dikocok dan diaduk (Gambar 10.1).
- Ditentukan pH-nya menggunakan kertas pH atau pH meter dan diatur menjadi 5,6 menggunakan HCI 0,1N jika lebih atau menggunakan NaOH 0,1 N jika kurang.
- Labu dipanaskan untuk melarutkan agar-agar dalam media secara sempurna.
- Labu ditutup dengan kapas, ditutup dengan kertas kerajinan dan diikat dengan benang atau karet gelang.
- Disterilkan pada suhu 121°C (tekanan 15 psi) selama 15 menit dalam autoklaf.
- Setelah sterilisasi, dikeluarkan dari autoklaf dan dibiarkan dingin beberapa saat, tanpa membiarkan media memadat. Jika media telah disiapkan dan dipadatkan selama penyimpanan, maka harus dicairkan dengan cara dipanaskan secara hati-hati sampai benar-benar meleleh.
- Kaca preparat dan kaca penutup disterilkan dengan api dengan cara mencelupkannya, dengan bantuan penjepit, ke dalam gelas kimia berisi etanol 95% dan kemudian melewatkannya di atas api pembakar bunsen sampai semua etanol terbakar. slide dan slip penutup.
- Dengan tusuk gigi, garis tipis petroleum jelly dioleskan pada ketiga sisi cekungan slide rongga untuk menahan slip penutup, saat diletakkan di atasnya. Sisi keempat, tersisa ke arah sisi panjang, slide berfungsi sebagai ventilasi untuk lewatnya udara.
- Dengan bantuan pipet pasteur steril, secara aseptis satu sampai dua tetes media agar Sabouraud yang telah didinginkan dan disterilkan dimasukkan ke dalam rongga slide.
- Slip penutup yang disterilkan dengan api ditempatkan di atas cekungan, sehingga benar-benar tersegel di ketiga sisinya.
- Slide disimpan dalam posisi tegak di tepi yang lebih panjang, sehingga sisi yang tidak tertutup tetap berada di atas dan media tidak bocor ke bawah. Media dibiarkan memadat dalam posisi ini.
- Gelas penutup dipindahkan ke bawah dan spora dari biakan uji jamur diinokulasikan pada media padat dalam depresi rongga kaca dengan bantuan loop yang disterilkan dengan api secara aseptis, lebih disukai dalam ruang aliran laminar.
- Slip penutup didorong ke atas ke posisi semula, sehingga menutup rongga.
- Sepotong kertas saring berbentuk lingkaran diletakkan di dasar cawan petri dan dibasahi dengan air steril untuk memberikan suasana lembab di dalam cawan petri.
- Sebatang kaca berbentuk U diletakkan di atas kertas saring.
- Slide yang telah diinokulasi diletakkan pada batang berbentuk U.
- Penutup cawan petri diganti dan cawan petri diinkubasi pada suhu 37°C selama tujuh hari dalam inkubator. Kertas saring dibasahi kembali, bila perlu.
- Untuk pengamatan mikroskopis, sediaan basah jamur biakan disiapkan dengan mensuspensi sebagian biakan dalam beberapa tetes larutan biru kapas laktofenol pada kaca objek. Perawatan diambil untuk menghindari kerusakan struktur jamur.
- Preparat sediaan basah diamati dengan perbesaran daya rendah dan daya tinggi dengan bantuan mikroskop diseksi (mikroskop sederhana).
Pengamatan:
- Morfologi koloni jamur yang dibudidayakan dicatat.
- Penampilan mikroskopis jamur di bawah mikroskop sederhana dicatat.
- Fungi tersebut kemudian diidentifikasi dengan membandingkan morfologi koloni dan penampakan mikroskopisnya dengan ciri-ciri pengenal dari fungi yang berbeda.
