Eksperimen untuk menumbuhkan virus hewani dalam telur ayam berembrio!
Prinsip:
Virus hanya dapat tumbuh dalam sistem kehidupan. Mereka tidak dapat tumbuh di media yang tidak hidup seperti agar nutrisi atau kaldu nutrisi. Oleh karena itu, budidaya mereka membutuhkan sel inang yang rentan terhadap virus tertentu.
Virus seperti bakteriofag yang menginfeksi dan tumbuh dalam sel bakteri dibudidayakan dengan menggunakan biakan sel bakteri sebagai sistem hidup.
Sebagai contoh, virus coliphage (bakteriofag) dibudidayakan menggunakan biakan bakteri E. coli. Sebaliknya, virus hewan, yang menginfeksi dan tumbuh di dalam tubuh hewan, memerlukan sistem hidup hewan yang rentan.
Tiga sistem hewan hidup yang digunakan untuk kultivasi virus hewan di laboratorium adalah sebagai berikut:
- Hewan Rentan:
Pada teknik ini, virus yang akan dibudidayakan dibiarkan tumbuh di dalam tubuh hewan hidup seperti tikus atau marmut yang rentan terhadap virus tersebut. Teknik ini tidak lagi digunakan karena digantikan oleh teknik yang lebih baru, efisien dan ekonomis berikut ini.
- Kultur Jaringan:
Ini adalah teknik yang sangat canggih. Di sini sel hewan yang diketahui rentan terhadap virus untuk dibudidayakan dan juga diketahui berkembang biak dengan cepat pertama kali diisolasi dari jaringan hidup hewan yang sesuai. Sel-sel ini ditempatkan dalam wadah kaca atau plastik yang berisi media nutrisi yang sangat kaya. Sel-sel menempel pada permukaan pembuluh dan terus membelah sampai seluruh permukaan ditutupi dengan satu lapisan sel yang konfluen. Ini disebut kultur jaringan.
Kemudian, virus yang akan dibiakkan diinokulasikan ke dalam kultur jaringan yang rentan. Virus menginfeksi sel-sel hidup dari kultur jaringan, menumbangkan mesin metabolisme mereka dan bereplikasi dengan cepat, sehingga tumbuh subur di dalam sel.
- Telur Ayam Embrio:
Dengan teknik yang sederhana dan ekonomis ini, virus yang akan dibudidayakan disuntikkan ke dalam telur ayam berembrio. Virus tumbuh di dalam telur ayam hidup dan menyebabkan penyakit pada embrio, yang dimanifestasikan oleh beberapa gejala penyakit (efek sitopatogenik) khusus untuk virus tersebut. Kehadiran gejala-gejala ini menunjukkan pertumbuhan virus itu di dalam telur.
Bahan yang Dibutuhkan:
Dua telur ayam berembrio, alat lilin, tingtur yodium, kapas penyerap, alkohol 70%, bor kecil, pengenceran virus Newcastle 1:2, jarum suntik, vasper steril, saline steril, cawan petri, pembakar bunsen, ruang aliran laminar, tabung pembuangan , inkubator.
Prosedur:
- Dua telur ayam berembrio dililinkan menggunakan alat candling untuk menunjukkan viabilitas embrio. Embrio layak, jika menunjukkan gerakan sebagai respons terhadap panas dari cahaya. Posisi kantung udara dan pembuluh darah besar juga ditentukan dan ditandai pada kulit telur selama candling (Gambar 8.7).
- Cangkang didesinfeksi di atas kantung udara dengan tingtur yodium dan kemudian dibiarkan mengering. Tempat yang sama diusap dengan kapas penyerap yang dibasahi alkohol 70%.
- Ujung bor kecil disterilkan dengan cara dicelupkan ke dalam alkohol 70% lalu dibakar.
- Dengan menggunakan bor ini, lubang kecil dibuat secara aseptik pada cangkang di atas kantung udara di daerah yang jauh dari pembuluh darah.
- 0,2 ml dari pengenceran 1:2 virus Newcastle disuntikkan secara aseptik ke dalam rongga allantoic salah satu dari dua telur menggunakan jarum suntik yang disterilkan. Caranya dengan menahan telur dalam posisi vertikal, memasukkan jarum suntik melalui lubang pada cangkang hingga gagangnya dengan sudut 45°, menusuk selaput kantung udara dan menembus ke dalam rongga alantois. Telur yang diinokulasi virus ini berfungsi sebagai ‘telur uji’.
- Setelah inokulasi, jarum dicabut dan lubang pada cangkang ditutup dengan vasper panas steril.
- Dengan menggunakan teknik yang sama, 0,2 ml saline steril diinokulasikan ke dalam telur ayam berembrio lainnya, yang berfungsi sebagai ‘telur kontrol’.
- Kedua telur tersebut diinkubasi pada suhu 37°C selama 3 sampai 4 hari dalam inkubator dengan kelembaban yang sesuai.
- Pengamatan dicatat setiap hari.
- Setelah kematian ditentukan, embrio dikeluarkan dari cangkangnya dan isinya dituangkan ke dalam cawan petri dan diamati kembali.
- Semua bahan yang terkontaminasi dibuang ke dalam gelas kimia berisi bubuk pemutih.
Pengamatan:
- Telur dililin setiap hari selama inkubasi dan diamati kematian embrio yang dibuktikan dengan berhentinya pergerakan, yang biasanya terjadi 3 sampai 4 hari setelah inokulasi virus.
- Setelah kematian ditentukan, embrio dikeluarkan dari cangkangnya dan isinya dituangkan ke dalam cawan petri. Hal ini diamati untuk lesi nekrotik dan bukti perdarahan.
- Telur kontrol diperiksa untuk bukti efek sitopatogenik.
- Pengamatan dicatat pada Tabel 8.2.
