Bertujuan untuk melakukan pewarnaan kapsul bakteri, untuk mengamati kapsul bakteri.
Tujuan:
Pada beberapa bakteri, dinding sel dikelilingi oleh selubung sel kental yang disebut ‘kapsul’. Itu terbuat dari polisakarida, glikoprotein atau polipeptida.
Ketika kapsul terlalu tipis untuk diamati di bawah mikroskop cahaya, itu disebut ‘mikrokapsul’ dan ketika terlalu tebal sehingga banyak sel tertanam dalam matriks kapsuler; itu disebut ‘lendir’.
Berdasarkan ada atau tidaknya kapsul, bakteri dibedakan menjadi dua jenis sebagai berikut:
(1) Bakteri Berkapsul:
Bakteri yang memiliki kapsul adalah bakteri berkapsul.
(2) Bakteri Non-kapsul:
Bakteri yang tidak memiliki kapsul adalah bakteri yang tidak berkapsul
Pewarnaan kapsul bertujuan untuk mengamati kapsul bakteri dengan membedakan bahan kapsul dari sel bakteri.
Prinsip:
Dalam pewarnaan kapsul, apusan bakteri dibuat di tengah slide. Itu tidak fiksasi panas, karena penyusutan sel yang disebabkan oleh pemanasan dapat menciptakan zona bening di sekitar sel, yang mungkin disalahartikan sebagai kapsul.
Selain itu, karena bahan kapsuler larut dalam air dan dapat dicuci dengan pencucian yang kuat, hanya dua reagen yang digunakan untuk pewarnaan tanpa pencucian air di antaranya. Salah satu dari dua reagen adalah pewarna utama, kristal ungu. Ini memberi warna ungu-biru tua pada keduanya, sel dan juga kapsul.
Namun, itu ‘diserap’ ke dalam sel karena sifat ionik dari komponen seluler, sedangkan itu hanya ‘mengikuti’ kapsul, karena sifat non-ionik dari bahan kapsuler. Untuk mencegah lepasnya bahan kapsular, apusan tidak dicuci dengan air.
Reagen kedua, tembaga sulfat bertindak baik sebagai agen penghilang warna dan noda. Ini dekolorisasi dengan menghilangkan kelebihan kristal violet dari sekitar sel serta kristal violet yang menempel pada kapsul. Ini juga melawan noda pada kapsul dan memberi warna biru muda padanya. Kapsul sekarang tampak biru muda, sedangkan sel tampak ungu-biru tua.
Bahan yang Dibutuhkan:
Slide, loop, minyak imersi, mikroskop, pewarnaan kristal violet, larutan tembaga sulfat (20%).
Prosedur:
- Slide dibersihkan dengan benar di bawah air ledeng, sehingga air tidak tertinggal sebagai tetesan di permukaannya (Gambar 5.14).
- Air yang menempel diseka dengan kertas bibulous dan slide dikeringkan dengan udara.
- Apusan bakteri disiapkan di tengah kaca objek dengan dua metode sebagai berikut.
(sebuah) Jika bakteri yang tumbuh pada cawan agar atau agar miring akan diamati, setetes air diletakkan di tengah kaca objek dan ose bakteri dari cawan atau slant dipindahkan ke sana dengan ose yang disterilkan di atas api. Kemudian, dengan memutar loop secara perlahan pada tetesan, suspensi bakteri dibuat dan disebarkan hingga diperoleh apusan.
(b) Jika bakteri yang tumbuh dalam kaldu cair akan diamati, setetes suspensi bakteri ditempatkan langsung di tengah kaca objek dengan ose yang disterilkan dengan api dan apusan dibuat dengan menyebarkannya.
- Apusan dikeringkan dengan udara. Tidak ada fiksasi panas yang dilakukan karena penyusutan sel yang dihasilkan dapat menciptakan zona bening di sekitar bakteri, yang dapat disalahartikan sebagai kapsul.
- Apusan digenangi dengan pewarna primer, crystal violet, selama 5-7 menit.
- Apusan dicuci dengan larutan tembaga sulfat 20%. Untuk mencegah lepasnya bahan kapsular, apusan tidak dicuci dengan air.
- Slide dikeringkan dengan kertas bibulous.
- Slide dijepitkan ke panggung mikroskop dan apusan diamati dengan daya rendah dan objektif kering tinggi.
- Setetes minyak imersi dioleskan pada apusan.
- Apusan diamati di bawah lensa objektif dengan minyak imersi.
Pengamatan:
- Warna area di sekitar sel:
Biru muda: Ada kapsul (bakteri berkapsul)
Ungu-biru tua: Kapsul tidak ada (bakteri non-kapsul)
- Warna sel:
Ungu-biru tua
- Jika berkapsul, ukuran kapsul:
Kecil, sedang atau besar.
- Ukuran relatif sel dan kapsul:
Dengan perkiraan mata, buatlah gambar lapangan di bawah lensa objektif perendaman minyak, yang menunjukkan ukuran relatif sel dan kapsul.
