Catatan Berguna tentang Mikroskop Elektron!
Mikroskop elektron dikembangkan pada tahun 1930-an. Ini adalah alat yang ampuh untuk mempelajari ultrastruktur sel karena memiliki kekuatan resolusi yang jauh lebih besar daripada mikroskop cahaya (daya resolusi 250 kali lipat dari mikroskop cahaya).
Prinsip:
Dalam mikroskop elektron, berkas elektron melewati spesimen dan difokuskan oleh lensa elektrostatik dan/atau magnetik. Objek dilihat pada layar neon atau difoto.
Sumber Gambar : caf.ua.edu/wp-content/uploads/equip/JEOL_7000.jpg
Peningkatan resolusi mikroskop elektron dimungkinkan karena jalur elektron dapat diselesaikan pada jarak yang jauh lebih kecil daripada cahaya. Dalam praktiknya, resolusi 10 A adalah umum, dan resolusi yang lebih besar (hingga 2 A) dimungkinkan dengan teknik khusus.
Alih-alih menggunakan cahaya tampak untuk menerangi objek (seperti yang digunakan dalam mikroskop cahaya), mikroskop elektron menggunakan berkas elektron yang dipercepat, dan memfokuskan berkas elektron dengan elektromagnet (lensa magnetik). Gambar terbentuk ketika elektron menumbuk layar neon atau ketika mereka jatuh langsung ke film fotografi, menghasilkan mikrograf elektron.
Berbeda dengan mikroskop cahaya majemuk, di mana pembentukan gambar tergantung terutama pada perbedaan dalam penyerapan cahaya, mikroskop elektron membentuk gambar sebagai akibat dari perbedaan cara elektron tersebar oleh berbagai daerah objek. Elektron memiliki daya tembus yang sangat rendah, yaitu mudah dihamburkan oleh benda-benda yang dilaluinya.
Tingkat di mana elektron tersebar ditentukan oleh ketebalan dan kerapatan atom objek. Daerah dengan kerapatan tinggi (yaitu, memiliki atom dengan nomor atom tinggi) menyebarkan elektron lebih banyak daripada daerah dengan kerapatan lebih rendah dan akibatnya tampak lebih gelap pada gambar akhir.
Spesimen yang digunakan dalam mikroskop elektron harus sangat tipis (tebal 10 hingga 50 nm). Jika bagian tidak terlalu tipis, sebagian besar elektron akan tersebar dan gambar gelap yang seragam akan dihasilkan.
Filamen logam atau katoda mikroskop elektron memancarkan aliran elektron ketika dipanaskan dalam ruang hampa. Melalui kumparan magnet, yang bertindak sebagai kondensor, elektron difokuskan pada objek dan kemudian dibelokkan oleh kumparan magnet lain, yang bertindak sebagai lensa objektif dan memberikan bayangan objek yang diperbesar. Ini diterima oleh lensa magnetik ketiga, yang bertindak sebagai lensa okuler atau proyeksi dan memperbesar bayangan dari lensa objektif.
Gambar akhir dapat divisualisasikan pada layar neon atau difoto. Pemfokusan gambar dapat disesuaikan dengan memvariasikan arus dalam lensa proyektor. Lensa objektif dan lensa proyektor memberikan kontribusi yang hampir sama terhadap perbesaran dan dimungkinkan untuk menghasilkan perbesaran total hingga 160.000 kali. Karena elektron menempuh jarak jauh hanya dalam ruang hampa, instrumen harus benar-benar tertutup dalam ruang hampa.
Bagian tipis penting untuk studi EM:
Spesimen tebal akan menyebarkan bagian yang sangat tipis diperlukan. Semakin tipis bagiannya, semakin baik resolusinya. Sekarang dimungkinkan untuk menyiapkan bagian setipis 100 A dengan teknik itu. Menjaga jaringan atau fragmen sel dari kerusakan fisik dan kimia. Bahannya juga harus kering.
Fiksatif:
Fiksatif yang paling banyak digunakan dalam mikroskop elektron adalah osmium tetroksida dan formaldehida. Osmium tetroxide mencegah kerusakan bahan lipid selama pengeringan dan melindungi spesimen dari kerusakan akibat pengeringan atau pembekuan.
Fiksatif ini paling efektif pada pH fisiologis dan suhu beku. Kalium permanganat telah terbukti sangat efektif untuk menjaga struktur membran dalam sel, dan memberikan kontras yang tinggi. Glutaraldehida pada konsentrasi 6,5% dalam buffer fosfat sangat berharga untuk studi histokimia enzim.
Penyematan dan pemotongan bagian, dll:
Setelah fiksasi, spesimen disematkan dalam bahan plastik, seperti metakrilat, atau dalam resin seperti Araldite, dan bagian tipis dipotong pada mikrotom yang dirancang khusus dengan pisau kaca atau berlian. Sebuah bagian kemudian ditempatkan pada membran yang sangat tipis, tidak lebih tebal dari 150 A.
Membran ini harus cukup kuat untuk tidak robek dan harus menghasilkan sebaran elektron sesedikit mungkin. Membran semacam itu dapat dibuat dari collodion (nitroselulosa), formvar (polivinil formal), karbon, aluminium, atau berilium. Collodion dan formvar adalah yang paling umum digunakan dan karbon, aluminium dan berilium menyediakan membran paling tipis dan paling transparan. Membran ini didukung oleh kisi-kisi logam, biasanya dari baja atau tembaga berjaring halus.
