Tes Coombs adalah teknik yang sederhana dan cerdik. Tes Coombs pertama kali dijelaskan pada tahun 1908 oleh Moreschi dan kemudian ditemukan kembali oleh RR Coombs dan rekan kerjanya pada tahun 1945 untuk menunjukkan antibodi non-aglutinasi terhadap antigen sel darah merah.
(Antibodi disebut antibodi ‘non- aglutinasi’ karena antibodi tidak dapat menyebabkan aglutinasi, terlepas dari ikatannya dengan antigen pada sel darah merah. Antibodi juga terkadang disebut sebagai ‘antibodi tidak lengkap’ karena antibodi tidak menyebabkan aglutinasi. Tetapi tidak ada ketidaklengkapan dalam struktur molekul antibodi.)
Antibodi non-aglutinasi, pada kenyataannya, berikatan dengan antigen pada permukaan sel darah merah. Tetapi aglutinasi sel darah merah yang diharapkan tidak terjadi. Ketika antibodi lain (disebut anti-antibodi atau antiglobulin) terhadap antibodi terikat RBC ditambahkan, terjadi aglutinasi. Antibodi berikatan dengan daerah Fc dari antibodi yang terikat sel darah merah dan membentuk kisi, yang mengarah ke aglutinasi. Tes ini disebut tes antiglobulin atau tes Coombs.
Ada dua jenis tes anti-globulin:
- Tes antiglobulin langsung (DAT)
- Uji antiglobulin tidak langsung (LAT)
- Tes anti-globulin langsung (DAT) digunakan untuk mendeteksi antibodi, yang terikat pada sel darah merah in vivo.
Sel darah merah yang dicuci dari pasien dicampur dengan anti-globulin.
sebuah†”
Anti-globulin mengikat antibodi non-aglutinasi pada permukaan sel darah merah dan menyebabkan aglutinasi yang terlihat. Hasil tesnya adalah DAT positif (Gbr. 16.6).
Oleh karena itu DAT positif menunjukkan bahwa sel darah merah pasien dilapisi dengan antibodi non-aglutinasi dan pasien dikatakan positif DAT.
saya. DAT positif terjadi pada sel darah merah bayi baru lahir dengan penyakit hemolitik pada bayi baru lahir (sel darah merah HDN dilapisi dengan antibodi anti-Rh).
- Saat ini, DAT digunakan untuk mendeteksi antibodi IgG dan C3b yang terikat pada permukaan sel darah merah. Pada pasien dengan hemolisis, tes DAT berguna untuk menentukan apakah hemolisis merupakan etiologi imun atau tidak.
Gambar 16.6: Uji aglutinasi langsung Coomb (DAT).
DAT digunakan untuk mendeteksi keberadaan antibodi non-aglutinasi yang terikat pada permukaan sel darah merah. A. Sel darah merah individu yang telah dicuci dicampur dengan reagen anti-globulin. Anti-globulin berikatan dengan daerah Fc dari antibodi terikat RBC dan menyebabkan aglutinasi yang terlihat, dan individu tersebut dikatakan positif DAT. B. Jika sel darah merah tidak dilapisi dengan antibodi, tidak akan terjadi aglutinasi dan orang tersebut dikatakan negatif DAT. DAT juga digunakan untuk mendeteksi keberadaan sel darah merah yang dilapisi antibodi anti-Rh pada bayi baru lahir yang diduga menderita penyakit hemolitik pada bayi baru lahir.
saya. Penyebab hemolisis non-imun [seperti koagulasi intravaskular diseminata, defisiensi enzim sel darah merah [seperti defisiensi dehidrogenase glukosa-6-fosfat (defisiensi G6PD), defek membran sel darah merah (seperti sferositosis herediter, PNH), dan hemoglobinopati (seperti anemia sel sabit, talasemia)] adalah DAT negatif.
- Penyebab kekebalan dari hemolisis (seperti anemia hemolitik autoimun, hemolisis yang diinduksi obat, reaksi transfusi hemolitik) adalah DAT positif.
aku aku aku. DAT positif karena C3 saja terlihat pada pasien dengan autoantibodi dingin, hemoglobinurea dingin paroksismal, dan dalam beberapa kasus anemia hemolitik yang diinduksi obat.
- Tes aglutinasi tidak langsung (IAT) digunakan untuk mendeteksi adanya antibodi yang tidak terikat terhadap sel darah merah dalam serum pasien.
saya. IAT untuk mendeteksi antibodi anti-Rh dalam serum ibu:
Serum ibu diinkubasi dengan sel darah merah golongan darah O Rh positif. Jika antibodi anti-Rh ada dalam serum ibu, antibodi akan berikatan dengan sel darah merah. Sel darah merah kemudian dicuci.
sebuah†”
Kemudian reagen anti-globulin ditambahkan.
sebuah†”
Jika antibodi anti-Rh ada dalam serum ibu, sel darah merah akan diaglutinasi dan tesnya positif untuk IAT.
ii. IAT untuk mendeteksi antibodi dalam serum penerima terhadap sel darah merah donor selama transfusi darah:
Tes IAT digunakan secara luas (sebelum transfusi darah) dalam pencocokan silang sel darah merah donor dengan serum penerima untuk mendeteksi keberadaan antibodi pada penerima, yang dapat bereaksi dengan sel darah merah donor.
Cuci sel darah merah donor.
sebuah†”
Tambahkan serum penerima ke sel darah merah dan inkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit.
sebuah†”
Cuci sel darah merah.
sebuah†”
Tambahkan reagen anti-globulin.
Pengembangan aglutinasi menunjukkan bahwa serum penerima memiliki antibodi terhadap sel darah merah donor dan tes dilaporkan positif untuk antibodi. Hasil IAT positif menunjukkan bahwa darah donor yang diusulkan tidak boleh ditransfusikan ke penerima yang bersangkutan.
Persiapan reagen uji anti-globulin (juga disebut reagen Coombs) mengandung ‘koktail’ antibodi monoklonal yang diarahkan terhadap IgG dan C3b manusia (Pengikatan antibodi non-aglutinasi ke sel darah merah mengaktifkan sistem komplemen yang mengakibatkan pengendapan fragmen C3b di atas sel darah merah; dan karena itu selain antibodi, sel darah merah juga dilapisi dengan fragmen C3b).
