Uji Fermentasi Karbohidrat pada Bakteri untuk mengetahui Kemampuannya Memfermentasi Karbohidrat

Uji Fermentasi Karbohidrat pada Bakteri untuk Mengetahui Kemampuannya Memfermentasi Karbohidrat!

Prinsip:

Beberapa bakteri memiliki kemampuan memfermentasi karbohidrat, terutama gula. Di antara mereka, setiap bakteri hanya dapat memfermentasi beberapa gula, sementara yang lain tidak dapat memfermentasi.

Jadi, gula yang dapat difermentasi oleh bakteri dan gula yang tidak dapat difermentasi adalah karakteristik dari bakteri.

Uji fermentasi karbohidrat dilakukan untuk menguji, secara terpisah, kemampuan bakteri memfermentasi gula seperti glukosa, sukrosa, laktosa, maltosa dan xilosa serta turunan alkoholnya seperti aesculin, salisin, adonitol, dulcitol dan sorbitol. Jika bakteri dapat memfermentasi gula atau turunan gula, maka akan dihasilkan asam yang menurunkan pH mengubah warna bromokresol ungu dari ungu menjadi kuning.

Selain itu, jika merupakan ‘bakteri aerogenik’, maka dihasilkan asam dan gas (C0 ₂ ), sedangkan jika merupakan bakteri ananaerogenik, hanya dihasilkan asam tanpa gas. Produksi gas ditunjukkan dengan akumulasinya sebagai gelembung dalam tabung Durham terbalik (tabung uji mini).

Pada uji fermentasi karbohidrat, bakteri uji ditumbuhkan dalam media kaldu yang mengandung salah satu gula atau turunan gula dan bromokresol ungu. Tabung Durham terbalik disimpan terendam di dalamnya.

Jika bakteri “memiliki kemampuan memfermentasi gula atau gula turunannya, warna kaldu berubah dari ungu menjadi kuning. Jika akumulasi gas terlihat sebagai gelembung di tabung Durham, itu adalah bakteri akrogenik, sedangkan jika tidak ada akumulasi gas yang terlihat, itu adalah bakteri anerogenik.

Bahan yang Dibutuhkan:

Tabung reaksi, tabung Durham, labu berbentuk kerucut, sumbat kapas, loop inokulasi, autoklaf, pembakar bunsen, ruang aliran laminar, tabung pembuangan, inkubator, kaldu karbohidrat (kaldu yang mengandung gula tertentu atau turunan gula seperti glukosa, sukrosa, laktosa, maltosa, xilosa , aesculin, salisin, adonitol, dulcitol, sorbitol dll.), koloni terisolasi atau biakan murni bakteri.

Prosedur:

1. Bahan media kaldu karbohidrat (mengandung karbohidrat yang dibutuhkan dan bromokresol ungu sebagai komponen utama) atau bubuk siap pakai yang dibutuhkan untuk 100 ml kaldu ditimbang dan dilarutkan dalam 100 ml air suling dalam labu berbentuk kerucut 250 ml dengan gemetar dan berputar-putar (Gambar 7.8).

2. Ditentukan pH-nya menggunakan kertas pH atau pH meter dan diatur menjadi 6,8 menggunakan HC1 0,1N jika lebih banyak atau menggunakan NaOH 0,1N jika lebih sedikit. Labu dipanaskan, jika perlu, untuk melarutkan bahan sepenuhnya.
3. Kaldu didistribusikan ke dalam lima tabung reaksi (masing-masing kurang lebih 10 ml).
4. Satu tabung Durham dimasukkan dalam keadaan terbalik ke dalam kaldu di masing-masing tabung reaksi. Tabung Durham berisi udara di dalamnya dan mengapung. Selama sterilisasi, uap panas menggantikan udara ini, yang karenanya dibenamkan ke dalam kaldu. Dengan demikian, tidak perlu mengeluarkan udara dari dalam tabung Durham dengan mengisinya dengan kaldu sebelum sterilisasi agar tetap terendam di dalam kaldu.
5. Tabung reaksi ditutup dengan kapas, ditutup dengan kertas kerajinan dan diikat dengan benang atau karet gelang.
6. Tabung kaldu disterilkan pada suhu 121°C (tekanan 15 psi) selama 15 menit dalam autoklaf. Secara alternatif, 90 ml media basal (media tanpa karbohidrat) disterilkan dalam autoklaf dan setelah pendinginan, 10 ml larutan karbohidrat (10%) yang disterilkan dengan filtrasi membran ditambahkan. Ini sangat penting untuk karbohidrat yang peka terhadap panas, yang mengalami degradasi selama sterilisasi panas.
7. Tabung kaldu dibiarkan dingin hingga suhu kamar.
8. Bakteri uji diinokulasi secara aseptis, sebaiknya dalam ruang aliran laminar, ke dalam kaldu dengan bantuan loop inokulasi yang disterilkan di atas api bunsen. Loop disterilkan setelah setiap inokulasi.
9. Tabung kaldu yang telah diinokulasi diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam dalam inkubator.

Pengamatan:

1. Warna kaldu berubah menjadi kuning dan gas terakumulasi dalam tabung Durham: Fermentatif untuk karbohidrat dan akrogenik.
2. Warna kaldu berubah menjadi kuning, tetapi tidak ada gas yang terkumpul di tabung Durham: Fermentatif untuk karbohidrat dan bersifat anerogenik.
3. Warna kaldu tidak berubah: Non-fermentatif untuk karbohidrat.