Bertujuan untuk melakukan pewarnaan dasar bakteri secara sederhana, mengamati bentuk, ukuran dan susunannya.
Tujuan:
Tidak mungkin untuk mengamati bentuk, ukuran dan susunan alami bakteri dengan pewarnaan dasar, karena karakteristik ini terdistorsi oleh fiksasi panas.
Selain itu, beberapa bakteri (misalnya spirilli) sulit untuk diwarnai.
Dengan demikian, pewarnaan negatif dilakukan karena dua alasan sebagai berikut:
(sebuah) Untuk mengamati bentuk, ukuran dan susunan alami bakteri, karena tidak dilakukan fiksasi panas di sini.
(b) Untuk mengamati bakteri tersebut, manakah yang sulit untuk diwarnai?
Prinsip:
Sel bakteri membawa muatan negatif pada permukaannya, yang karenanya dikelilingi oleh kation, seperti Na + dan K + (Gambar 5.9). Dalam pewarnaan asam, pewarnaan asam digunakan, yang terionisasi menjadi kromogen anionik (ion pewarna bermuatan negatif) dan kation.
Kromogen bermuatan negatif ditolak oleh muatan negatif permukaan pada sel bakteri, sehingga pewarna tidak dapat menembus sel. Sekarang, sel-sel yang tidak ternoda mudah terlihat dengan latar belakang berwarna.
Bahan yang Dibutuhkan:
Slides, loop, pewarna asam (eosin/nigrosin), broth/plate/kultur miring bakteri, mikroskop, minyak imersi.
Prosedur:
- Slide dibersihkan dengan benar di bawah air ledeng, sehingga air tidak tertinggal sebagai tetesan di permukaannya (Gambar 5.10).
- Air yang menempel diseka dengan kertas bibulous dan slide dikeringkan dengan udara.
- Setetes kecil pewarna asam (nigrosin/eosin) ditempatkan di dekat salah satu ujung kaca objek.
- Sebuah loop disterilkan di atas api dan didinginkan. Secara aseptik, ose bakteri dari agar plate atau agar miring atau ose suspensi bakteri dari cairan kaldu dipindahkan ke tetesan noda. Suspensi bakteri dalam noda dibuat dengan mencampurkan simpul bakteri dengan lembut pada tetesan noda, sedemikian rupa sehingga tetesannya tidak menyebar.
- Kaca objek bersih lainnya dipegang dengan sudut 30° terhadap kaca objek pertama, sedemikian rupa sehingga, salah satu tepi sempit kaca objek pertama menyentuh permukaan kaca objek berikutnya menuju ujung tanpa noda jatuh.
- Dalam posisi miring itu, slide kedua ditarik ke depan menuju tetesan noda, hingga ujungnya menyentuh tetesan dan tetesan menyebar di sepanjang tepinya.
- Dalam posisi miring tersebut, slide kedua didorong ke belakang hingga membentuk apusan tipis bakteri.
- Apusan dikeringkan dengan udara. Fiksasi panas tidak dilakukan di sini.
- Slide dijepitkan ke panggung mikroskop dan apusan diamati dengan daya rendah dan objektif kering tinggi.
- Setetes minyak imersi dioleskan pada apusan.
- Apusan diamati dengan objektif oil-immersion.
Pengamatan (Under Oil-immersion Objective):
- Bentuk bakteri:
Bulat (coccus)
Berbentuk batang (basil)
Seperti koma (vibrio)
Spiral (spirocheta)
- Susunan bakteri:
Berpasangan (diplobacillus / diplococcus)
Dalam empat (tetrad)
Berantai (streptococcus/streptobacillus)
Cluster seperti anggur (staphylococcus)
Kuboid (sarcinae atau oktet)
- Ukuran bakteri:
Dengan perkiraan mata, buatlah gambar bidang di bawah tujuan perendaman minyak.
