Imunofluoresensi digunakan untuk mendeteksi antigen dalam sel!
Senyawa fluoresen sebagai imunokimia untuk mendeteksi antigen pada jaringan diperkenalkan oleh Coons (1941).
Imunofluoresensi digunakan untuk mendeteksi antigen dalam sel atau jaringan (menggunakan antibodi yang diketahui) serta deteksi antibodi dalam serum (menggunakan antigen yang diketahui). Fluoresensi adalah pancaran cahaya dari satu warna ketika zat terkena cahaya warna lain. Ketika zat fluoresen dieksitasi dengan cahaya dengan panjang gelombang tertentu, ia menyerap cahaya dan memancarkan cahaya dengan panjang gelombang lain.
saya. Fluorescein isothiocyanate (FITC) memiliki daya serap maksimum cahaya pada 490-495 nm, dan memancarkan cahaya pada 530 nm (warna hijau).
- Tetramethyl rhodamine isothiocyanate memiliki absorbansi cahaya maksimum pada 550 nm dan memancarkan cahaya warna merah (580 nm).
sebuah. Imunofluoresensi langsung:
Teknik ini digunakan untuk mendeteksi antigen dalam sel atau jaringan.
Jaringan, yang memiliki antigen yang tidak diketahui, difiksasi pada slide kaca.
sebuah†”
Antiserum yang dikenal (spesifik untuk antigen yang diinginkan) terkonjugasi ke FIT (dikenal sebagai konjugat) dilapisi pada jaringan dan diinkubasi.
saya. Jika antigen yang diinginkan ada di jaringan, konjugasi berikatan dengan antigen.
sebuah†”
Kemudian slide dicuci untuk menghilangkan konjugat yang tidak terikat.
sebuah†”
Slide kemudian dilihat di bawah mikroskop fluoresen.
saya. Warna hijau cerah akan terlihat jika ada antigen di dalam jaringan.
- Jika tidak ada antigen dalam jaringan, semua konjugat akan dicuci selama langkah pencucian dan akibatnya, tidak ada warna hijau.
Teknik ini juga digunakan untuk mendeteksi adanya antigen bakteri atau virus pada jaringan yang terinfeksi.
b. Imunofluoresensi tidak langsung:
Teknik ini digunakan untuk mendeteksi antibodi dalam serum.
Sel-sel yang mengandung antigen yang diketahui difiksasi pada slide kaca.
sebuah†”
Serum uji ditambahkan di atas slide dan diinkubasi.
saya. Jika ada antibodi (melawan antigen dalam sel) dalam serum, antibodi akan berikatan dengan antigen dalam sel.
sebuah†”
Kemudian slide dicuci untuk menghilangkan komponen serum yang tidak terikat.
sebuah†”
Imunoglobulin anti-manusia yang terkonjugasi dengan FITC ditambahkan dan diinkubasi.
saya. Imunoglobulin anti-manusia terkonjugasi FITC akan berikatan dengan antibodi serum yang terikat pada antigen sel.
sebuah†”
Setelah dicuci, slide dilihat di bawah mikroskop fluoresen.
saya. Adanya warna hijau cerah menunjukkan bahwa serum memiliki antibodi terhadap antigen di dalam sel.
- Tidak adanya warna hijau menunjukkan tidak adanya antibodi serum terhadap antigen dalam sel yang digunakan.
