Penggunaan Klinis Flow Cytometer!
- Pencacahan sel yang berbeda (seperti sel T dan sel B).
- Deteksi antigen sel B dan klasifikasi keganasan hematopoietik (leukemia dan limfoma).
- Deteksi antigen pada permukaan sel myeloid, yang berguna dalam diagnosis sindrom myelodysplastic dan leukemia myeloid.
- Molekul CD34 diekspresikan pada permukaan sel induk-progenitor hematopoietik. Sel punca yang diisolasi dari sumsum tulang atau darah tepi dihitung dengan menggunakan mAb berlabel ke CD34, sehingga jumlah pasti sel punca dapat dihitung dan ditransfusikan ke pasien. Sel punca yang tersisa disimpan dalam nitrogen cair dan dapat ditransfusikan nanti ke pasien yang sama, jika diperlukan.
- Fenotipe HLA mAb berlabel krom fluor untuk setiap antigen HLA digunakan untuk berikatan dengan antigen MHC kelas I dan kelas II pada permukaan sel. Sel-sel berwarna kemudian dianalisis (ketika sel-sel lulus sebagai satu kolom) dalam flow cytometer.
- Deteksi antigen intraseluler
Sel-sel pertama-tama diperlakukan dengan agen yang membuat sel permeabel, tanpa merusak sel sepenuhnya.
sebuah†”
Setelah itu, sel diperlakukan dengan pengawet ringan untuk mengikat silang protein sitoplasma di tempatnya dan mencegahnya bocor keluar dari sel.
sebuah†”
Kemudian sel diperlakukan dengan mAb berlabel diarahkan terhadap antigen intraseluler. MAb berlabel memasuki sel dan berikatan dengan antigen intraseluler.
sebuah†”
Sel-sel dilewatkan melalui flow cytometer untuk menilai sel-sel yang diwarnai.
saya. Deteksi terminal deoxynucleotide transferase (TdT) intraseluler membantu menentukan keganasan sel B dini. TdT adalah enzim yang diekspresikan selama penataan ulang gen imunoglobulin yang bertanggung jawab untuk penambahan nukleotida acak di persimpangan segmen imunoglobulin. Oleh karena itu, ekspresi TdT dalam populasi sel B yang ganas menunjukkan fenotipe sel B yang sangat belum matang.
- Deteksi myeloperoxidase intraseluler membantu dalam klasifikasi berbagai subtipe leukemia myeloid.
- Analisis kandungan DNA sel. Flow cytometer dapat menilai jumlah materi genetik dalam sel dan menentukan fraksi fase-S atau jumlah aneuploidi dalam populasi sel, a. Ploidi DNA Sel normal yang mengandung dua salinan kromosom disebut sel diploid.
Semua sel (kecuali ovum dan sperma) yang tidak diploid dianggap aneuploid dan dapat berfungsi sebagai indikator neoplasia yang andal. Sejumlah besar sel dalam tumor memiliki jumlah DNA yang menyimpang. Analisis aliran cytometric DNA dilakukan dengan inkubasi sel permeabilisasi dengan pewarna fluoresen (seperti propidium iodida).
Pewarna interkalasi menjadi DNA dan fluoresensi. Jumlah fluoresensi berbanding lurus dengan kandungan DNA sel. Efektivitas kemoterapi untuk keganasan pada pasien dapat dinilai dengan analisis ploidi. Analisis Ploidi menentukan jumlah total DNA inti dalam sel tumor individu. Indeks DNA adalah rasio fluoresensi DNA sel tumor dengan fluoresensi DNA sel normal. Indeks DNA sel diploid normal adalah 1. Indeks DNA lebih atau kurang dari 1 menunjukkan tumor aneuploid.
- Analisis siklus sel DNA:
Kandungan DNA sel pada berbagai fase siklus sel selama replikasi (yaitu, fase Gq/Gj- fase pra sintesis DNA; fase S- sintesis DNA; fase G2/M- fase pasca-sintesis DNA) dapat diukur untuk menilai pertumbuhan sel dan agresivitas kanker. Lebih banyak DNA disintesis oleh sel kanker yang agresif. Sel yang melewati fase S menunjukkan sintesis DNA yang berbanding lurus dengan agresivitasnya.
- Banyak tes fungsional leukosit dapat dilakukan dengan flow cytometer.
saya. Produksi O 2 – (superoksida) sebagai uji penyakit granulomatosa kronis.
- Deteksi viabilitas sel:
Pewarna propidium iodida masuk ke dalam sel yang membrannya pecah dan struktur nukleusnya terganggu. Oleh karena itu, dengan propi dium iodida, sel mati akan berpendar sedangkan sel hidup tidak berpendar. Selain itu, fluoresensi propidium iodida berada di bagian spektrum yang sangat merah. Oleh karena itu, metode ini dapat digabungkan dengan pewarnaan mAb biasa, di mana sel mati diwarnai merah dan karenanya dapat dihilangkan dari analisis data.
- Metode flow cytometric untuk mendeteksi sel yang mengalami apoptosis juga tersedia.
