Bacalah artikel ini untuk mempelajari tentang uji besi tiga gula pada Bakteri untuk Mengetahui Kemampuan Memproduksi Hidrogen Sulfida!
Bertujuan untuk melakukan tes tiga gula besi (tes TSI), untuk mengetahui kemampuan bakteri untuk memanfaatkan salah satu atau lebih dari tiga gula, seperti glukosa, sukrosa dan laktosa serta kemampuannya untuk menghasilkan hidrogen sulfida (H 2 S), yang mengurangi besi.
Prinsip:
Beberapa bakteri memiliki kemampuan untuk memanfaatkan satu atau lebih dari tiga gula seperti glukosa, sukrosa, dan laktosa.
Jika salah satu atau lebih dari tiga gula (gula tiga kali lipat) digunakan, asam dihasilkan, yang mengurangi pH mengubah warna fenol merah dari merah menjadi kuning.
Selain itu, beberapa bakteri memiliki kemampuan untuk menghasilkan hidrogen sulfida (H 2 S) dengan memanfaatkan senyawa belerang. H2S yang dihasilkan bergabung dengan senyawa besi, besi sulfat, untuk membentuk endapan hitam besi sulfida.
Dalam uji tiga gula besi (uji TSI), bakteri uji ditumbuhkan pada agar miring yang mengandung glukosa, sukrosa, laktosa, fenol merah, natrium tiosulfat, dan besi sulfat. Sementara media mengandung glukosa (yaitu D-glukosa atau dekstrosa) pada konsentrasi rendah 0,1%, konsentrasi sukrosa dan laktosa tetap tinggi pada 1%.
Jika bakteri memiliki kemampuan untuk memanfaatkan salah satu atau lebih dari ketiga gula tersebut, warna media berubah dari merah menjadi kuning. Jika bakteri memiliki kemampuan untuk menghasilkan H 2 S, media menjadi hitam. Karena tiga gula dan senyawa besi digunakan dalam media, tes ini disebut uji tiga gula besi.
Bahan yang Dibutuhkan:
Tabung reaksi, labu berbentuk kerucut, sumbat kapas, jarum inokulasi, autoklaf, pembakar bunsen, ruang aliran laminar, tabung pembuangan, inkubator, agar triple sugar iron (TSI), koloni terisolasi atau biakan murni bakteri.
Prosedur:
- Bahan media agar TSI (mengandung 3 gula dan zat besi sebagai komponen utama) atau bubuk siap pakai yang diperlukan untuk 100 ml media ditimbang dan dilarutkan dalam 100 ml air suling dalam labu berbentuk kerucut 250 ml dengan cara gemetar dan berputar-putar (Gambar 7.7).
- Ditentukan pH-nya menggunakan kertas pH atau pH meter dan diatur menjadi 7,4 menggunakan HCI 0,1N jika lebih atau menggunakan NaOH 0,1N jika kurang.
- Labu dipanaskan untuk melarutkan agar-agar dalam media secara sempurna.
- Sebelum memadat, media dalam keadaan cair hangat disebarkan ke dalam 5 tabung reaksi (masing-masing kurang lebih 20 ml).
- Tabung reaksi ditutup dengan kapas, ditutup dengan kertas kerajinan dan diikat dengan benang atau karet gelang.
- Disterilkan pada suhu 121°C (tekanan 15 psi) selama 15 menit dalam autoklaf.
- Setelah disterilkan, dikeluarkan dari autoklaf dan disimpan dalam posisi miring untuk mendinginkan dan memadatkan media, sehingga diperoleh agar miring TSI.
- Bakteri uji diinokulasi secara aseptik, lebih disukai dalam ruang aliran laminar, ke dalam miring dengan menusuk ke pantat dan menggores permukaan miring dengan bantuan jarum yang disterilkan dengan api. Jarum disterilkan setelah setiap inokulasi.
- Slant yang telah diinokulasi diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam dalam inkubator.
Pengamatan:
- Puntung kuning dan miring merah dengan atau tanpa produksi gas (pecah di pantat agar):
Pantat asam dan kemiringan basa telah terbentuk. Di sini hanya glukosa yang digunakan secara anaerobik (fermentasi) membuat pantat menjadi asam (kuning). Tidak ada gula lain yang digunakan. Karena konsentrasi glukosa kurang (0,1%), sejumlah kecil asam yang dihasilkan pada permukaan miring dioksidasi dengan cepat sehingga menjadi basa (merah).
Selanjutnya, dominasi oksidatif pepton yang ada dalam medium menghasilkan NH Y yang membuat kemiringan menjadi basa (merah). Namun, di pantat, kondisi asam tetap terjaga karena berkurangnya ketersediaan oksigen dan pertumbuhan bakteri yang lebih lambat. Dengan demikian, bakteri tersebut adalah glukosa positif.
- Pantat kuning dan kemiringan kuning dengan atau tanpa produksi gas:
Pantat asam dan kemiringan asam telah terbentuk. Di sini, laktosa dan/atau sukrosa telah difermentasi. Karena konsentrasinya dalam medium tinggi, mereka menghasilkan asam dalam jumlah besar yang menghasilkan kemiringan asam dan pantat asam serta mempertahankan kondisi asam. Dengan demikian, bakteri tersebut adalah sukrosa/laktosa positif.
- Pantat merah dan kemiringan merah:
Tak satu pun dari ketiga gula tersebut telah difermentasi. Sebaliknya, pepton telah dikatabolisme dalam kondisi anaerobik dan/atau aerobik, menghasilkan kondisi basa karena produksi amonia.
Jika hanya terjadi degradasi aerobik pepton, hanya permukaan miring yang menjadi basa (merah). Jika terjadi degradasi pepton secara aerobik dan anaerobik, baik slant maupun butt menjadi basa (merah). Dengan demikian, bakteri tersebut adalah gula negatif.
- Menghitamkan bokong:
Selain salah satu dari kondisi di atas, jika pantat menghitam, ini menunjukkan bahwa bakteri mampu menghasilkan H 2 S dengan memanfaatkan belerang anorganik (natrium tiosulfat) yang ada dalam media.
H 2 S bergabung dengan besi sulfat dalam medium untuk membentuk endapan hitam besi sulfida yang mengakibatkan perubahan warna medium menjadi hitam. Jadi, bakteri tersebut positif H 2 S.
- Pantat tidak menghitam:
Bakteri tidak mampu menghasilkan H 2 S menggunakan belerang anorganik (natrium tiosulfat) yang ada di dalam medium. Jadi, bakteri tersebut negatif H 2 S.
