Uji Deaminisasi Fenilalanin pada Bakteri untuk Mengetahui Kemampuannya Mendeaminasi Asam Amino (Dengan Gambar)

Baca artikel ini untuk mempelajari tentang uji deaminasi fenilalanin pada bakteri untuk mengetahui kemampuannya mendeaminasi Asam Amino!

Prinsip:

Beberapa bakteri memiliki kemampuan untuk mendeaminasi asam amino fenilalanin, karena dapat menghasilkan enzim ‘fenilalanin deaminase’.

Enzim ini mendeaminasi fenilalanin dengan menghilangkan gugus aminonya, sehingga menghasilkan asam fenilpiruvat (asam keto) dan amonia (NH ₃ ). Asam fenilpiruvat membentuk warna hijau dengan larutan besi klorida.

Pada uji fenilalanin deaminase, bakteri uji ditumbuhkan pada agar miring yang mengandung fenilalanin. Jika bakteri memiliki kemampuan untuk mendeaminasi fenilalanin, warna miring berubah dari kuning menjadi hijau, setelah diteteskan larutan besi klorida ke atasnya.

Bahan yang Dibutuhkan:

Tabung reaksi, labu berbentuk kerucut, sumbat kapas, loop inokulasi, autoklaf, pembakar bunsen, ruang aliran laminar, tabung pembuangan, inkubator, agar fenilalanin, larutan besi klorida (10%), koloni terisolasi atau biakan murni bakteri.

Prosedur:

1. Bahan media agar fenilalanin (mengandung fenilalanin sebagai komponen utama) atau bubuk siap pakai yang dibutuhkan sebanyak 100 ml media ditimbang dan dilarutkan dalam 100 ml air suling dalam labu berbentuk kerucut 250 ml dengan cara dikocok dan diaduk ( Gambar 7.17).

2. Ditentukan pH-nya menggunakan kertas pH atau pH meter dan diatur menjadi 7,2 menggunakan HCI 0,1N jika lebih atau menggunakan NaOH 0,1N jika kurang.
3. Labu dipanaskan untuk melarutkan agar-agar dalam media secara sempurna.
4. Sebelum memadat, media dalam keadaan cair hangat disebarkan ke dalam 5 tabung reaksi (masing-masing kurang lebih 20 ml).
5. Tabung reaksi ditutup dengan kapas, ditutup dengan kertas kerajinan dan diikat dengan benang atau karet gelang.
6. Disterilkan pada suhu 121°C (tekanan 15 psi) selama 15 menit dalam autoklaf.
7. Setelah sterilisasi, dikeluarkan dari autoklaf dan disimpan dalam posisi miring untuk mendinginkan dan memadatkan media, sehingga diperoleh agar fenilalanin agar miring.
8. Bakteri uji diinokulasi secara aseptis, lebih disukai dalam ruang aliran laminar, dengan menggores permukaan miring dengan bantuan loop yang disterilkan dengan api. Loop disterilkan setelah setiap inokulasi.
9. Slant yang telah diinokulasi diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 sampai 48 jam dalam inkubator.
10. 4-5 tetes larutan besi klorida (10%) ditambahkan ke setiap kemiringan.

Pengamatan:

1. Warna miring berubah menjadi tumbuh. Fenilalanin deaminase positif.
2. Warna miring tetap kuning: Phenylalanine deaminase negatif.