Bertujuan untuk mempelajari Prinsip Kerja dan Pengoperasian Peralatan yang digunakan di Laboratorium Mikrobiologi. Laboratorium mikrobiologi modern harus dilengkapi dengan peralatan berikut.
1. Oven Udara Panas untuk Sterilisasi:
Ini digunakan untuk sterilisasi peralatan gelas, seperti tabung reaksi, pipet dan cawan petri. Sterilisasi kering semacam itu hanya dilakukan untuk barang pecah belah. Zat cair, seperti media yang disiapkan dan larutan garam tidak dapat disterilkan dalam oven, karena kehilangan air akibat penguapan.
Peralatan gelas disterilkan pada suhu 180°C selama 3 jam. Oven (Gambar 3.2) memiliki kontrol termostat, yang dengannya suhu konstan yang diperlukan dapat diperoleh dengan coba-coba. Pembacaan dial termostat adalah perkiraan dan suhu yang tepat dibaca dengan memasukkan termometer ke dalam oven atau pada termometer berbentuk L bawaan.
Pada oven modern (Gambar 3.3), terdapat tampilan suhu digital dan pengatur suhu otomatis untuk mengatur suhu yang diinginkan dengan mudah. Waktu diatur oleh timer digital. Setelah memasukkan barang pecah belah, pintu ditutup dan oven dinyalakan.
Suhu yang diperlukan diatur. Setelah oven mencapai suhu yang disetel, waktu sterilisasi yang diperlukan diatur pada pengatur waktu. Oven mati secara otomatis setelah waktu yang ditentukan. Oven dibuka, hanya setelah suhunya turun mendekati suhu kamar. Jika tidak, jika pintu dibuka, saat bagian dalam oven masih sangat panas, udara dingin dapat masuk dan memecahkan peralatan gelas.
2. Oven Pengeringan:
Untuk persiapan reagen tertentu, peralatan gelas, setelah dibersihkan dan dibilas dengan air suling, harus dikeringkan. Gelas dikeringkan di dalam oven pengering pada suhu 100°C sampai gelas benar-benar kering.
3. Autoklaf:
Autoclave adalah inti dari laboratorium mikrobiologi. Alat ini digunakan tidak hanya untuk mensterilkan zat cair seperti media yang sudah disiapkan dan larutan salin (pengencer), tetapi juga untuk mensterilkan peralatan gelas, jika diperlukan.
Ini memiliki prinsip kerja yang sama dengan pressure cooker domestik. Suhu maksimum yang dapat diperoleh dengan merebus air dalam wadah terbuka adalah 100°C (titik didih air).
Suhu ini cukup untuk membunuh hanya pembentuk non-spora, tetapi sulit untuk membunuh bakteri pembentuk spora pada suhu ini, karena mereka keluar dengan membentuk spora tahan panas. Membutuhkan waktu yang sangat lama untuk membunuh spora pada suhu ini.
Di sisi lain, ketika air dididihkan dalam wadah tertutup, karena tekanan yang meningkat di dalamnya, titik didihnya meningkat dan suhu uap bisa mencapai lebih dari 100°C. Suhu tinggi ini diperlukan untuk membunuh semua bakteri termasuk pembentuk spora yang tahan panas. Temperatur uap meningkat dengan meningkatnya tekanan uap (Tabel 3.1).
Tabel 3.1: Temperatur yang dapat dicapai pada berbagai tekanan uap:
Dalam mengoperasikan autoklaf vertikal standar, (Gambar 3.4) air yang cukup dituangkan ke dalamnya. Jika air terlalu sedikit, bagian bawah autoklaf menjadi kering selama pemanasan dan pemanasan lebih lanjut akan merusaknya.
Jika memiliki elemen pemanas air built-in, (Gambar 3.5) ketinggian air harus dipertahankan di atas elemen tersebut. Di sisi lain, jika terlalu banyak air, butuh waktu lama untuk mencapai suhu yang diinginkan.
Bahan yang akan disterilkan ditutup dengan kertas kriya dan disusun di atas rangka aluminium atau kayu yang diletakkan di dasar autoklaf, sebaliknya jika bahan tetap setengah terendam atau mengambang, bahan akan berjatuhan saat direbus dan air dapat masuk. Autoklaf ditutup kedap udara sempurna hanya dengan menjaga katup pelepas uap tetap terbuka.
Kemudian, dipanaskan di atas api atau dengan elemen pemanas bawaan. Udara di dalam autoklaf harus dibiarkan keluar sepenuhnya melalui katup ini. Ketika uap air terlihat keluar melalui katup, itu tertutup.
Suhu dan tekanan di dalam terus meningkat. Peningkatan tekanan diamati pada tombol tekanan. Biasanya sterilisasi dilakukan pada suhu 121°C (tekanan 15 pound per square inch yaitu 15 psi) selama 15 menit. Waktu yang diperlukan dipertimbangkan dari titik, ketika suhu-tekanan yang diperlukan tercapai.
Setelah suhu-tekanan yang dibutuhkan tercapai, itu dipertahankan dengan mengendalikan sumber pemanas. Setelah waktu yang ditentukan (15 menit), pemanasan dihentikan dan katup pelepas uap dibuka sedikit. Jika segera dibuka penuh, karena penurunan tekanan secara tiba-tiba, cairan dapat keluar dari wadah.
Secara bertahap, pelepasan uap dibuka lebih banyak, sehingga memungkinkan semua uap keluar. Autoklaf dibuka hanya setelah tekanan turun kembali ke tekanan atmosfer normal (0 psi). Autoklaf tidak boleh dibuka, ketika masih ada tekanan di dalamnya. Bahan yang sudah disterilkan panas dihilangkan dengan memegangnya dengan selembar kain bersih atau sarung tangan berlapis asbes.
Dalam kasus otoklaf horizontal berjaket uap, ketel menghasilkan uap (Gambar 3.6). Itu dilepaskan pada tekanan yang ditentukan, ke ruang luar (jaket). Udara dibiarkan keluar dan kemudian katup pelepas uapnya ditutup.
Jaket panas memanaskan ruang dalam, sehingga memanaskan bahan yang akan disterilkan. Ini mencegah kondensasi uap pada bahan. Sekarang, uap di bawah tekanan dilepaskan dari jaket ke ruang dalam dan udara dibiarkan keluar darinya.
Kemudian, katup pelepas uapnya ditutup. Uap bertekanan di ruang dalam mencapai suhu lebih dari 100°C, yang dapat mensterilkan bahan yang disimpan di dalamnya. Autoklaf juga memiliki sistem penutupan otomatis yaitu kecuali suhu dan tekanan turun mendekati kondisi ruangan, pintu tidak dapat dibuka.
Selain pengatur tekanan, alat ini juga memiliki pengatur suhu terpisah untuk menunjukkan suhu di dalam ruang dalam. Selain itu, autoklaf mempertahankan suhu dan tekanan secara otomatis dan mati setelah waktu sterilisasi yang ditentukan.
4. Inkubator Mikrobiologi:
Pertumbuhan mikroba yang banyak diperoleh di laboratorium dengan menumbuhkannya pada suhu yang sesuai. Hal ini dilakukan dengan menginokulasikan mikroba yang diinginkan ke dalam media kultur yang sesuai dan kemudian menginkubasinya pada suhu optimum untuk pertumbuhannya.
Inkubasi dilakukan dalam inkubator (Gambar 3.7), yang mempertahankan suhu konstan yang sesuai untuk pertumbuhan mikroba tertentu. Karena sebagian besar mikroba patogen bagi manusia tumbuh subur pada suhu tubuh manusia normal (yaitu 37°C), suhu inkubasi yang biasa adalah 37°C.
Inkubator memiliki termostat, yang mempertahankan suhu konstan, diatur sesuai kebutuhan. Pembacaan suhu pada termostat adalah perkiraan. Suhu yang akurat dapat dilihat pada termometer yang terpasang pada inkubator. Suhu yang tepat, sesuai kebutuhan, diatur dengan memutar kenop termostat secara coba-coba dan mencatat suhu pada termometer.
Sebagian besar inkubator modern (Gambar 3.8) dapat diprogram, yang tidak memerlukan pengaturan suhu coba-coba. Di sini, operator mengatur suhu yang diinginkan dan jangka waktu yang diperlukan.
Inkubator secara otomatis memeliharanya sesuai kebutuhan. Kelembaban disediakan dengan menempatkan gelas berisi air di dalam inkubator selama masa pertumbuhan. Lingkungan yang lembab menghambat dehidrasi media dan dengan demikian, menghindari hasil percobaan yang palsu.
5. Inkubator BOD (Inkubator Suhu Rendah):
Beberapa mikroba harus tumbuh pada suhu yang lebih rendah untuk tujuan tertentu. Inkubator suhu rendah BOD (Gambar 3.9), yang dapat mempertahankan suhu dari 50°C hingga serendah 2-3°C digunakan untuk inkubasi dalam kasus seperti itu.
Suhu konstan yang diinginkan diatur dengan memutar kenop termostat. Rotasi kenop termostat menggerakkan jarum pada dial yang menunjukkan perkiraan suhu. Suhu yang tepat yang dibutuhkan diperoleh, dengan memutar kenop secara halus dengan coba-coba dan mencatat suhu pada termometer yang terpasang pada inkubator.
Sebagian besar inkubator BOD modern (Gambar 3.10) dapat diprogram, yang tidak memerlukan pengaturan suhu coba-coba. Di sini, operator mengatur suhu yang diinginkan dan jangka waktu yang diperlukan. Inkubator secara otomatis memeliharanya sesuai kebutuhan.
6. Kulkas (Kulkas):
Ini berfungsi sebagai gudang untuk bahan kimia termolabil, larutan, antibiotik, serum dan reagen biokimia pada suhu yang lebih dingin dan bahkan pada suhu di bawah nol (kurang dari 0°C). Kultur stok bakteri juga disimpan di dalamnya di antara periode subkultur. Ini juga digunakan untuk penyimpanan media yang disterilkan, untuk mencegah dehidrasi.
7. Kulkas dalam:
Ini digunakan untuk menyimpan bahan kimia dan mengawetkan sampel pada suhu di bawah nol yang sangat rendah.
8. Saldo Top-pan Elektronik:
Ini digunakan untuk menimbang media dalam jumlah besar dan bahan kimia lainnya, di mana penimbangan yang tepat tidak begitu penting.
9. Neraca Analitik Elektronik:
Ini digunakan untuk menimbang bahan kimia dan sampel dalam jumlah kecil dengan tepat dan cepat.
10. Neraca Analitik Panci Ganda:
Ini digunakan untuk menimbang bahan kimia dan sampel dengan tepat. Penimbangan membutuhkan lebih banyak waktu, yang hanya digunakan dalam keadaan darurat.
11. Pabrik Air Suling:
Air digunakan dalam persiapan media dan reagen. Jika media dibuat menggunakan air ledeng, kotoran kimiawi yang ada di dalamnya dapat mengganggu pertumbuhan mikroorganisme di dalam media. Selain itu, semakin tinggi kandungan bakteri media, semakin lama waktu yang dibutuhkan untuk sterilisasinya dan semakin besar peluang bertahan hidup beberapa bakteri.
Air suling, meskipun tidak bebas bakteri, mengandung lebih sedikit bakteri. Itulah mengapa; itu lebih disukai dalam persiapan media mikrobiologi. Ini juga digunakan dalam persiapan reagen, karena kotoran kimiawi yang ada dalam air keran dapat mengganggu berfungsinya bahan kimia reagen.
Karena pembuatan air suling oleh kondensor Liebig adalah proses yang memakan waktu, di sebagian besar laboratorium, air suling disiapkan oleh ‘pabrik air suling’. Biasanya pabrik air suling terbuat dari baja atau kuningan. Ini juga disebut air suling.
Ini memiliki satu saluran masuk untuk dihubungkan ke keran air dan dua saluran keluar, satu untuk air suling jatuh ke dalam wadah dan yang lainnya untuk mengalirkan air pendingin panas ke bak cuci. Masih dipasang di dinding. Itu dipanaskan oleh elemen pemanas listrik built-in (pemanas perendaman).
Penyuling bekerja secara efisien, bila aliran air masuk disesuaikan sedemikian rupa sehingga suhu air pendingin yang mengalir keluar dari penyuling ke bak cuci tidak terlalu tinggi atau terlalu rendah, yaitu air hangat harus mengalir keluar. Air suling mungkin mengandung jejak logam yang terkorosi dari wadah baja atau kuningan.
Untuk mendapatkan air suling bebas logam digunakan alat destilasi kaca dan yang lebih baik lagi adalah alat destilasi kuarsa. Namun, untuk laboratorium mikrobiologi, alat distilasi baja atau gelas sudah cukup. Untuk analisis presisi, digunakan air suling dua atau tiga kali.
12. Sistem Pemurnian Air Ultra Murni:
Untuk pekerjaan analitik presisi, sekarang-a-hari, alih-alih menggunakan air sulingan ganda atau tiga kali lipat, air yang disaring mikro digunakan. Dalam kasus air suling, ada kemungkinan bahwa, beberapa zat volatil yang ada di dalam air menguap selama pemanasan air dan selanjutnya terkondensasi menjadi air suling yang terkumpul.
Dengan demikian, mungkin ada jejak zat tersebut dalam air suling. Untuk mengatasinya, air ultra murni digunakan. Di sini, air dibiarkan melewati pori-pori mikroskopis yang sangat halus, yang menahan partikel tersuspensi mikroskopis termasuk mikroba.
Kemudian, air melewati dua kolom resin penukar ion. Resin penukar anion menyerap teks yang ada di dalam air, sementara resin penukar teks menyerap anion. Air yang keluar sangat murni.
13. Homogenisasi:
Untuk analisis mikrobiologi, sampel cair langsung digunakan, sedangkan sampel padat harus dicampur secara menyeluruh dengan pengencer (biasanya garam fisiologis), sehingga diperoleh suspensi bakteri yang homogen. Suspensi ini diasumsikan mengandung bakteri secara homogen.
Pencampuran sampel padat dan pengencer dilakukan oleh homogenizer, di mana motor memutar impeler dengan bilah tajam dengan kecepatan tinggi di dalam cangkir homogenizer tertutup yang berisi sampel dan pengencer. Ini memiliki pengatur kecepatan untuk mengontrol kecepatan putaran impeler.
Di beberapa laboratorium pencampuran dilakukan secara manual dengan alu dan lesung yang telah disterilkan. Di laboratorium modern, kantong sekali pakai digunakan, di dalamnya sampel padat dan pengencer cair ditempatkan secara aseptik dan dicampur secara mekanis dengan gerakan peristaltik mesin pada kantong. Mesin ini disebut stomacher.
14. Pengukur pH:
pH meter adalah alat untuk menentukan pH media cair, sampel cair dan buffer. Ini memiliki elektroda pH kaca. Bila tidak digunakan, harus disimpan setengah terendam dalam air yang terkandung dalam gelas kimia kecil dan sebaiknya ditutup dengan toples lonceng untuk menghindari akumulasi debu di dalam air dan kehilangan air melalui penguapan.
Sebelum digunakan, meteran dikalibrasi menggunakan dua buffer standar yang diketahui pH-nya. Biasanya buffer pH 4.0, 7.0 dan 9.2 tersedia secara komersial. Instrumen dihidupkan dan dibiarkan selama 30 menit untuk pemanasan. Kenop kalibrasi suhu diputar ke suhu larutan yang pH-nya sesuai dengan yang diukur.
Kemudian, elektroda dicelupkan ke dalam buffer (pH 7,0). Jika pembacaan bukan 7.00, tombol kalibrasi pH diputar hingga pembacaan 7.00. Kemudian, elektroda dicelupkan ke dalam buffer lain (pH 4,0 atau 9,2).
Jika pembacaan sama dengan pH buffer yang digunakan, berarti instrumen bekerja dengan baik. Jika tidak, elektroda diaktifkan dengan mencelupkan 0,1 N HC1 selama 24 jam. Setelah kalibrasi, pH sampel ditentukan dengan mencelupkan elektroda ke dalamnya dan mencatat bacaannya.
Setiap kali, sebelum dicelupkan ke dalam larutan apa pun, elektroda harus dibilas dengan air suling. Sampel tidak boleh mengandung bahan lengket yang tersuspensi, yang dapat membentuk lapisan di ujung elektroda dan mengurangi kepekaannya.
Pengukur pH model lama memiliki elektroda ganda (salah satunya bertindak sebagai elektroda referensi), sedangkan model baru memiliki elektroda gabungan tunggal. Selain itu, untuk mengatasi masalah koreksi suhu, kini telah tersedia pH meter dengan koreksi suhu otomatis.
Di sini, ‘elektroda suhu’ lain juga dimasukkan ke dalam larutan bersama dengan elektroda pH, yang mengukur suhu larutan dan secara otomatis mengoreksi pengaruh variasi suhu.
Pengukur pH yang canggih memiliki elektroda gel tunggal. Elektroda semacam itu memiliki kemungkinan kerusakan yang sangat kecil, karena hampir seluruhnya tertutup dalam casing plastik keras kecuali di ujungnya. Ujungnya memiliki sensor pH dan suhu.
Selain itu, perawatannya mudah, karena tidak memerlukan pencelupan konstan dalam air suling, karena ujung elektroda ditutup dengan tutup plastik yang berisi larutan jenuh kalium klorida, saat tidak digunakan. Namun, dalam penyiapan media mikrobiologi, pH ditentukan dengan kertas pH kisaran sempit dan disesuaikan dengan pH yang dibutuhkan dengan menambahkan asam atau basa sesuai kebutuhan.
15. Pelat Panas:
Hot plate digunakan untuk memanaskan bahan kimia dan reagen. Hot plate terbuat dari plat besi yang dipanaskan oleh elemen pemanas listrik dari bawah. Tingkat pemanasan yang dibutuhkan diperoleh oleh regulator.
16. Pemandian Air Kocok:
Terkadang, diperlukan pemanasan pada suhu yang sangat tepat. Suhu yang tepat seperti itu tidak dapat diperoleh dalam inkubator atau oven, di mana suhunya berfluktuasi, meskipun sedikit. Namun, suhu yang tepat dapat dipertahankan dalam penangas air, yang menghasilkan suhu yang stabil.
Penangas air terdiri dari wadah berisi air, yang dipanaskan dengan elemen pemanas listrik. Suhu air yang dibutuhkan diperoleh dengan menambah atau mengurangi laju pemanasan dengan memutar termostat dengan coba-coba.
Dalam penangas air yang bergetar, zat tersebut dipanaskan pada suhu yang dibutuhkan dan pada saat yang sama, dikocok terus-menerus. Pengocokan dilakukan oleh motor yang berputar dan menggerakkan wadah ke sana kemari di setiap putaran. Tingkat goncangan sekali lagi dikendalikan oleh regulator. Mengguncang mengaduk zat dan meningkatkan laju proses.
Sebagian besar pemandian air modern dapat diprogram dan tidak memerlukan pengaturan suhu coba-coba. Suhu air yang diinginkan dapat dipertahankan selama periode waktu yang diinginkan dengan pemrograman yang sesuai. Ini digunakan untuk budidaya bakteri dalam media kaldu pada suhu tertentu.
17. Penghitung Koloni Quebec:
Dalam pencacahan bakteri dalam sampel, diasumsikan bahwa satu bakteri memunculkan satu koloni yang terlihat, ketika ditanam di piring media nutrisi yang dipadatkan. Jadi, dengan menghitung jumlah koloni, jumlah bakteri dalam suatu sampel dapat diperkirakan.
Terkadang, koloni sangat kecil dan terlalu padat sehingga sulit untuk dihitung. Penghitungan menjadi mudah, ketika penghitung tangan mekanis, yang disebut penghitung koloni Quebec (Gambar 3.11), digunakan. Ini membagi piring menjadi beberapa bagian persegi dan koloni diperbesar 1,5 kali dengan kaca pembesar, yang memudahkan penghitungan.
18. Penghitung Koloni Elektronik:
Penghitung koloni elektronik terdiri dari dua jenis:
(1) Penghitung koloni elektronik genggam dan
(2) Penghitung koloni elektronik di atas meja.
Penghitung koloni elektronik genggam adalah penghitung koloni bergaya pena dengan spidol tinta. Untuk menghitung koloni bakteri yang tumbuh di cawan petri, disimpan dalam posisi terbalik, sehingga koloni terlihat melalui permukaan bawah cawan petri.
Koloni ditandai dengan menyentuh permukaan kaca cawan petri dengan ujung pengukur koloni. Jadi, setiap koloni ditandai dengan sebuah titik yang dibuat dengan tinta ujung kempa di permukaan bawah cawan petri. Dalam satu gerakan, penghitung koloni elektronik menandai, menghitung, dan mengonfirmasi dengan bunyi bip.
Hitungan kumulatif koloni ditampilkan pada layar LED empat digit. Dalam hal penghitung koloni elektronik di atas meja, cawan petri yang berisi koloni bakteri ditempatkan pada panggung yang diterangi dan bilah penghitung ditekan. Jumlah koloni yang tepat langsung ditampilkan pada pembacaan digital.
19. Pengaduk Magnetik:
Dalam pembuatan larutan, bahan kimia tertentu memerlukan pengadukan yang lama, agar larut dalam pelarut tertentu. Pengaduk magnetik digunakan untuk melarutkan zat tersebut dengan mudah dan cepat. Magnet berlapis teflon kecil, yang disebut ‘batang pengaduk’, dimasukkan ke dalam wadah yang berisi pelarut dan zat terlarut.
Kemudian, wadah tersebut diletakkan di atas platform pengaduk magnet, di bawahnya sebuah magnet berputar dengan kecepatan tinggi oleh sebuah motor. Tertarik oleh magnet yang berputar, magnet berlapis teflon berputar di dalam wadah dan mengaduk isinya. Sekarang, zat terlarut larut dengan cepat.
Lapisan teflon mencegah magnet bereaksi dengan larutan yang bersentuhan dengannya. Setelah benar-benar larut, magnet yang dilapisi teflon dikeluarkan dari larutan dengan menggunakan long retriever, yang disebut ‘stirring bar retriever’.
20. Sonikator:
Ini digunakan untuk memecah sel menggunakan gelombang frekuensi tinggi.
21. Pengaduk Vortex:
Ini adalah instrumen yang digunakan untuk pencampuran cairan secara menyeluruh dalam tabung reaksi. Ia memiliki rotor, yang kecepatannya dapat dikontrol. Di ujung rotor ada bagian atas karet busa. Ketika bagian bawah tabung reaksi ditekan pada bagian atas karet busa ini, rotor mulai berputar, sehingga memutar bagian bawah tabung reaksi dengan kecepatan tinggi.
Karena gaya sentripetal, larutan tercampur rata. Ini sangat membantu selama pengenceran serial dalam pencacahan bakteri, yang membutuhkan suspensi sel bakteri yang homogen.
21. Ruang Aliran Laminar:
Ini adalah ruang (Gambar 3.12) yang digunakan untuk transfer aseptik bahan yang disterilkan, serta untuk inokulasi mikroba. Partikel debu yang mengambang di udara mengandung mikroba. Partikel debu yang mengandung mikroba ini dapat masuk ke dalam media yang telah disterilkan dan mencemari media, ketika dibuka untuk waktu yang singkat selama inokulasi mikroba atau dipindahkan dari satu wadah ke wadah lainnya.
Untuk mengatasinya, pada saat inokulasi dilakukan di udara terbuka, udara area inokulasi yang kecil disterilkan dengan nyala api bunsen burner. Udara yang dipanaskan menjadi ringan dan bergerak ke atas, sehingga mencegah partikel debu jatuh ke media selama proses pembukaan singkat.
Untuk lebih mengurangi kemungkinan kontaminasi oleh udara sarat mikroba, ruang aliran laminar digunakan. Ini adalah ruang berbentuk kubus yang dilengkapi kaca. Blower udara meniupkan udara dari sekitarnya dan melewatkannya melalui filter HEPA (Filter Udara Partikulat Efisiensi Tinggi), sehingga membuatnya bebas debu (bebas mikroba).
Udara bebas mikroba ini melewati ruangan secara laminar dan keluar dari ruangan melalui pintu depan yang terbuka. Aliran laminar udara bebas mikroba dari bilik ke luar melalui pintu yang terbuka mencegah udara luar masuk ke dalam bilik.
Dengan demikian, chamber tidak terkontaminasi mikroba yang ada di udara luar, meskipun pintunya tetap terbuka selama inokulasi atau transfer media. Lampu UV yang dipasang di dalam bilik mensterilkan bilik sebelum dioperasikan.
Ini memiliki platform baja tahan karat dengan ketentuan sambungan pipa gas untuk pembakar bunsen. Sebelum digunakan, platform dibersihkan dan didesinfeksi dengan lysol, pembakar bunsen disambungkan kemudian pintu kaca ditutup.
Lampu UV dinyalakan selama 10 menit untuk mensterilkan lingkungan di dalam chamber dan kemudian dimatikan. Pintu kaca tidak boleh dibuka saat sinar UV menyala, karena sinar UV memiliki efek merugikan pada kulit dan penglihatan. Blower dinyalakan kemudian pintu kaca dibuka.
Sekarang, pembakar bunsen dinyalakan dan pemindahan media atau inokulasi dilakukan di dalam chamber secara aseptik. Jika mikroba yang sangat berbahaya akan ditangani, digunakan ruang aliran laminar dengan sarung tangan yang diproyeksikan ke dalam ruang dari pintu kaca depan, karena inokulasi harus dilakukan dengan menjaga pintu depan tetap tertutup.
22. Penghitung Sel Elektronik:
Ini digunakan untuk secara langsung menghitung jumlah bakteri dalam sampel cairan yang diberikan. Contoh penghitung sel elektronik adalah ‘Coulter counter’. Dalam peralatan ini, suspensi sel bakteri dibiarkan melewati lubang kecil, di mana arus listrik mengalir.
Hambatan pada orifice dicatat secara elektronik. Ketika sebuah sel melewati lubang, menjadi non-konduktor, itu meningkatkan resistensi sesaat. Berapa kali resistensi meningkat sesaat dicatat secara elektronik, yang menunjukkan jumlah bakteri yang ada dalam sampel cair.
23. Alat Filtrasi Membran:
Zat tertentu seperti urea hancur dan kehilangan sifat aslinya, jika disterilkan dengan panas. Zat-zat tersebut disterilkan dengan peralatan filtrasi membran. Pada alat ini, larutan zat yang akan disterilkan disaring melalui filter membran yang tidak memungkinkan sel bakteri untuk lewat. Filtrasi dilakukan di bawah tekanan isap untuk meningkatkan laju filtrasi (Gambar 2.19, halaman 30).
24. Mikroskop:
Berbagai jenis mikroskop digunakan untuk pengamatan visual morfologi, motilitas, pewarnaan dan reaksi fluoresen bakteri.
25. Komputer:
Komputer umumnya digunakan untuk analisis hasil. Mereka juga digunakan untuk identifikasi bakteri dengan mudah dalam beberapa jam. Jika tidak, identifikasi bakteri merupakan proses yang membosankan dan membutuhkan waktu berhari-hari untuk mengidentifikasi satu spesies bakteri.
Komputer yang digunakan untuk identifikasi bakteri adalah Apple II, IBM PC dan TRS-80 serta varian modernnya. Setiap tenaga peneliti laboratorium harus dilengkapi dengan komputer, beserta fasilitas internet.
26. Spektrofotometer:
Ini adalah instrumen untuk mengukur perbedaan intensitas warna larutan. Seberkas cahaya dengan panjang gelombang tertentu dilewatkan melalui larutan uji dan jumlah cahaya yang diserap (atau ditransmisikan) diukur secara elektronik.
Spektrofotometer tampak sederhana dapat melewatkan cahaya dengan panjang gelombang dalam rentang tampak, sedangkan spektrofotometer UV-cum-terlihat dapat melewatkan cahaya dengan panjang gelombang dalam rentang ultraviolet dan juga dalam rentang tampak. Di laboratorium mikrobiologi, digunakan untuk menghitung langsung bakteri dalam suspensi maupun untuk keperluan lainnya.
27. Perangkat Listrik:
Fluktuasi tegangan listrik di laboratorium adalah salah satu alasan terpenting, yang mengurangi umur panjang peralatan dan terkadang merusaknya. Oleh karena itu, semua peralatan yang peka terhadap tegangan harus dilengkapi dengan perangkat pelindung tegangan seperti stabilisator, stabilisator servo, atau transformator tegangan konstan (CVT) sesuai rekomendasi produsen peralatan.
Komputer, timbangan, dan beberapa peralatan canggih harus disambungkan melalui catu daya tak terputus (UPS), karena gangguan apa pun pada catu daya listrik selama pengoperasiannya dapat menyebabkan kerusakan parah pada beberapa komponen sensitifnya.
Laboratorium harus memiliki generator berkapasitas tinggi untuk memasok arus listrik ke seluruh laboratorium jika listrik padam. Hal ini karena, kegagalan daya tidak hanya menghentikan aktivitas laboratorium, tetapi juga menyebabkan perubahan yang tidak dapat diubah yang tidak diinginkan pada sampel yang disimpan di lemari es dan lemari es.
28. Sistem Identifikasi Bakteri Otomatis:
Ini adalah instrumen yang digunakan untuk identifikasi bakteri dengan bantuan komputer secara otomatis (Gambar 3.13 dan 3.14). Metode identifikasi bakteri konvensional sangat panjang dan tidak praktis.
Ini terutama melibatkan pewarnaan, uji motilitas, karakteristik budaya, serangkaian tes biokimia dan akhirnya mencari nama bakteri dalam ‘Manual Bakteri Determinatif Bergey’ dengan mencocokkan hasilnya dengan yang tersedia di manual. Sistem identifikasi bakteri otomatis secara otomatis mengidentifikasi bakteri dalam waktu yang sangat singkat.
Sistemnya, seperti VITEK 2 (Gambar 3.14) menggunakan kartu sekali pakai. Satu kartu diperlukan untuk identifikasi satu bakteri. Sistem dapat menampung serangkaian kartu, yang dapat disusun dalam kaset, sehingga memungkinkan identifikasi beberapa bakteri sekaligus.
Setiap kartu memiliki beberapa baris sumur. Biasanya ada 8 baris masing-masing 8 sumur (8X8 =64 sumur). Sumur berisi media dehidrasi berbeda yang diperlukan untuk tes biokimia yang berbeda. Sebuah tabung kapiler dipasang pada setiap kartu, yang menghisap suspensi bakteri untuk diidentifikasi dan disalurkan ke semua lubang.
Media dehidrasi dalam sumur menjadi terhidrasi oleh cairan suspensi, sehingga memungkinkan pertumbuhan bakteri. Setelah masa inkubasi yang ditentukan, perubahan warna pada semua sumuran dicatat secara otomatis dalam sistem.
Hasil perubahan warna masuk ke komputer yang terhubung ke sistem. Komputer secara otomatis membandingkan hasilnya dengan yang tersedia di perpustakaannya untuk bakteri yang berbeda dan akhirnya memberikan nama bakteri dengan probabilitas yang pasti.
Untuk identifikasi, bakteri yang diberikan, yang tumbuh sebagai koloni terisolasi di piring atau sebagai kultur murni yang tumbuh miring diambil. Sejumput bakteri dipindahkan secara aseptik ke dalam larutan garam steril dalam tabung reaksi dan suspensi bakteri dibuat.
Suspensi harus mengandung kepadatan bakteri yang ditentukan, seperti yang ditentukan oleh densitometer. Tabung uji dipasang pada kaset dan kartu dipasang di dekatnya, sehingga ujung tabung kapiler hisap kartu tetap terendam dalam suspensi.
Beberapa tabung reaksi dan kartu tersebut dipasang pada setiap kaset, tergantung pada jumlah bakteri yang akan diidentifikasi. Kaset dimasukkan ke dalam ruang vakum sistem. Vakum tinggi dibuat di dalam ruangan, yang memaksa suspensi bakteri tersedot ke dalam tabung kapiler dan disalurkan ke dalam lubang kartu.
Kaset dikeluarkan dan dimasukkan ke dalam ruang inkubasi dan analisis. Di sini, tabung kapiler dipotong dan ujung potongan disegel secara otomatis. Kemudian, proses inkubasi dimulai pada suhu yang ditentukan untuk jangka waktu yang ditentukan, yang diprogram oleh panel kontrol. Selama inkubasi, setiap 15 menit, setiap kartu secara otomatis masuk ke pembaca warna, yang membaca perubahan warna di sumur dan mencatatnya.
Hasil yang direkam masuk ke komputer, yang secara otomatis membandingkannya dengan yang tersedia di perpustakaannya untuk bakteri yang berbeda. Terakhir, ini memberikan nama bakteri dengan probabilitas yang pasti. Kartu bekas jatuh ke ruang pembuangan limbah sistem untuk dibuang dan dibuang akhir setelah sterilisasi.
Sistem identifikasi bakteri otomatis yang terkenal adalah VITEK 2 dan API. Sementara VITEK 2 bekerja berdasarkan prinsip di atas, sistem API (Analytical Profile Indexing) (Gambar 3.13) menggunakan metode yang sedikit berbeda untuk identifikasi bakteri secara otomatis, yang melibatkan inokulasi manual dan inkubasi eksternal.
- PCR Thermocycler, Refrigerated Centrifuge, Ultra-centrifuge, Gas Chromatography (GC), High Performance Liquid Chromatography (HPLC), Thin Layer Chromatography (TLC), Paper Chromatography, Column Chromatography and Electrophoresis Unit:
Ini adalah instrumen yang digunakan untuk isolasi, pemurnian dan identifikasi zat biokimia, seperti DNA bakteri, plasmid, racun mikroba, dll. Reaksi berantai polimerase (PCR) adalah alat penting dalam metode berbasis asam nukleat. Ini adalah pekerja keras di laboratorium mikrobiologi dan bioteknologi modern.
