Artikel yang disebutkan di bawah ini memberikan catatan studi tentang sitometri aliran maju.
Flow cytometry adalah teknik terbaru yang dikembangkan selama dua dekade terakhir untuk mempelajari isi sel khususnya efisiensi pengemasan nuklir. Selain NPE, karakteristik fisik dan kimia dari isi berbagai sel dan kondisi patologis dapat dianalisis secara cepat dengan kesimpulan yang tepat.
Flow cytometer tersedia di pasaran dalam bentuk mesin. Mesin tersebut terdiri dari sistem cairan, sistem optik untuk mengumpulkan sinyal cahaya yang dihasilkan saat sel melewati laser. Mesin ini juga dilengkapi dengan sistem elektronik yang mengubah sinyal cahaya menjadi sinyal elektronik proporsional yang pada akhirnya didigitalkan untuk analisis komputer.
Sekitar 5000 sel per detik, mengukur secara individual satu demi satu, dari suspensi populasi heterogen dapat dipindai.
Sistem Fludics yang dirancang canggih dilengkapi dengan laser, optik, elektronik, dan penyortiran. Sistem Fludics memiliki Penyortir Sel Aktif Fluoresensi (sistem cairan FACS Calibur), selama penyortiran dapat mengurutkan akurasi jumlah sel tunggal.
Hasilnya adalah kemurnian tinggi dengan pemulihan yang berada di antara sel Tunggal dan Pemulihan. Ini telah dikontrol secara elektronik dengan tiga tombol untuk memilih mode operasional PRIME, STAND BY, dan RUN. Tingkat adalah kontrol sebagai Tinggi; (60ul/mnt), sedang (35 ul/mnt) dan Rendah (12 ul/mnt).
Eksitasi dan emisi, fluorokrom, filter, dan kompensasi warna adalah bagian penting dari peralatan. Filter 530/30 BP mengukur sinyal yang dipancarkan oleh Fluoresensi Isothiocyanate (Stain). Jika Phycoerythrin dan Popidium Iodide digunakan maka filter 585/42 BP digunakan. Filter 650 LP digunakan jika Peridinin Chlorophyll dan 7-Amino-Actinomycin D Signal dihasilkan.
Sinyal laser dibaca oleh perangkat lunak pencarian sel Becton Dickinson. Detektor neon dan filter band harus disesuaikan sesuai instruksi dan kebutuhan instrumen. Sumber cahaya laser Argon 488 nm dan band pass filter 623 nm umumnya ada dalam peralatan.
Itu juga memiliki sistem untuk menampilkan data dan analisis. Parameter penting adalah histogram, data multi-parameter, dan data mode daftar dan gerbang. Analisis mesin data dengan bantuan perangkat lunak disediakan dan memberikan histogram konten DNA versus hitungan yang ditampilkan di komputer secara otomatis (49.2).
Aplikasi flow cytometer sangat banyak dan merupakan anugerah untuk penelitian biologi dan untuk penyelidikan klinis pada banyak penyakit manusia. Flow cytometer digunakan untuk mempelajari garis keturunan darah dalam jaringan hemopoitik di sel ginjal kepala ikan yang bernapas dengan udara.
Sangat mudah untuk membedakan antara sel induk hematopoietik pluripoten dan fenotip populasi limfosit perifer fungsional yang matang. Penggunaan peralatan ini secara signifikan adalah untuk mempelajari apoptosis atau kematian sel dan juga untuk mempelajari nekrosis sel akibat toksisitas pestisida.
Karena sinyal pencar sudut lebar, dimungkinkan untuk menyelesaikan limfosit, monosit, dan granulosit dari spesimen darah utuh yang dilisiskan. Dimungkinkan juga untuk memisahkan trombosit dari kebisingan latar belakang. Hal ini digunakan untuk sistem kekebalan tubuh dan immunophenotyping. Ini digunakan untuk mempelajari leukemia, dan limfoma, penelitian transplantasi, pencacahan retikulosit dan analisis isi DNA seluler.
Karena mekanisme pemrosesan pulsa, ini menguntungkan dalam analisis siklus sel DNA. Analisis NPE digunakan untuk membedakan kanker payudara primer dan metastasis, kanker kolon primer dan metastasis kolon serta kanker lambung dan ovarium (Gambar 49.2).
Protokol yang digunakan adalah sel pertama diangkat dan difiksasi dalam 3% paraformal dehyde. Mereka permeabilisasi dengan 0,5% Triton x 100. DNA inti kemudian diberi label dengan popidium iodida setelah perawatan RNase menggunakan kit DNA Cycle Test Plus.
