Imunodifusi Antigen atau Antibodi !
Imunodifusi mengacu pada pergerakan antigen atau antibodi atau molekul antigen dan antibodi dalam media pendukung melalui difusi.
Antigen dan antibodi berikatan satu sama lain dan membentuk imunopresipitat yang tidak larut, yang terlihat dengan mata telanjang sebagai pita atau garis presipitin. J. Oudin menggambarkan sistem difusi tunggal antigen dan antibodi dalam tabung berisi agar.
Segera Ouchterlony menggambarkan difusi ganda dalam agar, berlapis pada slide. Gerakan juga digambarkan sebagai linier atau radial. Metode imunodifusi digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif protein serum. Namun metode yang lebih sensitif dan spesifik seperti enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA) dan radio immunoassay (RIA) hampir menggantikan metode imunodifusi.
Imunodifusi Tunggal:
Antigen atau antibodi tetap diam dan reaktan lainnya bergerak (teknik Difusi Oudin).
Imunodifusi Ganda:
Baik antigen dan antibodi bebas bergerak menuju satu sama lain. (teknik Ouchterlony).
Agar-agar cair dituangkan pada slide kaca atau cawan petri dan dibiarkan memadat. Dua sumur kecil dengan jarak beberapa milimeter dilubangi. Antigen dan larutan antibodi pengendap yang sesuai dijatuhkan di sumur yang berlawanan. Slide/petridish kemudian disimpan dalam ruang lembab selama 18-24 jam. Antigen dan antibodi bergerak melalui agar dan bergabung membentuk kompleks antigen-antibodi. Kompleks antigen-antibodi terlihat sebagai garis presipitasi.
Difusi ganda juga dilakukan dengan menempatkan sumur antigen dan antibodi pada berbagai sudut untuk tujuan perbandingan. Ketiga pola reaksi ini ditunjukkan pada Gambar 27.2.
saya. Reaksi identitas:
Antigen dalam dua sumur identik (Agl dan Ag2). Jadi reaksi dengan antibodi menghasilkan garis precipitin yang persis sama. Garis presipitin tidak bersilangan, tetapi membentuk garis kontinu. Fusi dari dua garis precipitin menunjukkan bahwa antibodi bereaksi dengan epitop yang biasanya ada pada dua antigen.
- Reaksi non-identitas:
Dua antigen non-identik (Agl dan Ag3) berada di sumur antigen sedangkan sumur antibodi memiliki antibodi terhadap kedua antigen tersebut. Dua garis presipitin antigen-antibodi yang terbentuk berbeda satu sama lain. Oleh karena itu kedua garis precipitin saling silang (bersinggungan) satu sama lain.
aku aku aku. Reaksi identitas parsial:
Penentu antigenik dalam antigen dua sumur dibagi sebagian (Agl dan Agla). Oleh karena itu antibodi bereaksi dengan antigen dan membentuk garis yang tidak membentuk persilangan lengkap. Garis precipitin melintasi hanya dalam satu arah. Garis presipitin yang diperpanjang disebut sebagai taji. Taji menunjukkan bahwa antibodi juga memicu epitop tambahan yang tidak ada di salah satu antigen.
Imunodifusi ganda juga dapat digunakan untuk analisis semikuantitatif antigen atau antibodi (Gambar 27.3):
Gambar 27.3:
Imunodifusi ganda untuk analisis antigen semi-kuantitatif. Antibodi ditempatkan di sumur pusat dan antigen ditempatkan dalam konsentrasi yang berbeda di sumur perifer
saya. Kuantisasi antigen:
Antigen X diencerkan secara berurutan dan ditempatkan di sumur yang mengelilingi sumur pusat tempat antibodi anti-X ditempatkan. Antigen dan antibodi berdifusi keluar dari sumur dan bereaksi satu sama lain, menghasilkan pembentukan garis presipitin di antara sumur antigen dan antibodi. Jumlah endapan antigen-antibodi berkurang dengan penurunan jumlah antigen di sumur yang berbeda. Oleh karena itu, ketebalan garis presipitin berkurang seiring dengan penurunan konsentrasi antigen.
ii. Kuantisasi antibodi:
Prosedur yang mirip dengan kuantisasi antigen digunakan, kecuali bahwa posisi antigen dan antibodi diubah. Antigen ditempatkan di sumur pusat dan antibodi pada pengenceran yang berbeda ditempatkan di sumur luar.
Imunodifusi Radial Tunggal:
Mancini memperkenalkan teknik baru untuk kuantisasi antigen yang akurat. Antibodi dicampur dengan agar cair dan dituangkan ke dalam cawan petri. Setelah agar agar mengeras, sumur dipotong, dan diisi dengan berbagai konsentrasi antigen (Gbr. 27.4).
Antigen berdifusi keluar dari sumur dan membentuk endapan kompleks antigen-antibodi dalam 48-72 jam. Endapan terlihat sebagai garis melingkar putih di sekitar setiap sumur. Diameter cincin melingkar berbanding lurus dengan konsentrasi antigen (yaitu, semakin banyak konsentrasi antigen, semakin besar diameter endapan).
Kurva standar dapat diplot dalam lembar grafik dengan memplot konsentrasi antigen yang diketahui pada sumbu X dan diameter pada sumbu Y. Antigen uji yang konsentrasinya tidak diketahui dapat ditentukan dengan menginterpolasi kurva standar dengan diameter endapan yang dibentuk oleh antigen uji.
Sensitivitas metode ini adalah 1-3 µg/ml antigen. Metode ini digunakan untuk mengukur konsentrasi IgG, IgM, atau IgA (dengan memasukkan antiserum anti-IgG, anti-IgM, atau anti-IgA ke dalam agar).
