Kultur Jaringan Tumbuhan (Tinjauan)

Budaya adalah istilah yang umumnya digunakan untuk pertumbuhan buatan. Kultur jaringan tanaman sebenarnya mengacu pada pertumbuhan sel, jaringan, dan organ tanaman pada media nutrisi buatan. Kultur jaringan adalah teknik eksperimental di mana massa sel (kalus) dihasilkan dari jaringan eksplan. Kalus yang dihasilkan melalui proses ini dapat dimanfaatkan secara langsung untuk meregenerasi planlet atau untuk mengekstraksi atau memanipulasi beberapa metabolit primer dan sekunder.

Persyaratan laboratorium kultur jaringan:

1. Fasilitas pencucian dan penyimpanan.
2. Persiapan media dan ruang penyimpanan.
3. Transfer area untuk manipulasi aseptik.
4. Ruang biakan atau inokulator untuk pemeliharaan biakan pada kondisi suhu, cahaya dan kelembaban yang terkendali.
5. Area observasi atau pengumpulan data.
6. Fasilitas pencucian dan penyimpanan:

sebuah. Membersihkan peralatan gelas:

Gelas direndam dalam larutan detergen selama 16 jam, kemudian dibilas terlebih dahulu dengan air ledeng diikuti dengan pembilasan kedua dengan air suling.

Jika pencucian dilakukan secara mekanis, dalam mesin pencuci piring, tatakan peralatan gelas diperlakukan dengan deterjen pada suhu 70°C selama 5-10 menit. pembersihan lebih lanjut meliputi pembilasan selama 5 menit dengan air panas, pembilasan selama 3 menit dengan air deionisasi, dan pembilasan tangan terakhir dengan air suling.

1. Peralatan laboratorium plastik:

(i) Wadah biakan polistiren sekali pakai yang telah disterilkan (falcon, corning) tersedia dan digunakan sebagai pengganti peralatan gelas untuk menghilangkan pencucian.

(ii) Peralatan plastik dapat dicuci dengan detergen lembut non-abrasif dan dibilas dengan air ledeng dan air suling.

2. Ruang penyiapan media:

Ruang persiapan media harus terpisah dan jauh dari laboratorium kerja. Area ini akan dimanfaatkan untuk persiapan media kultur. Ruangan harus dilengkapi dengan

1. Gelas
2. Wadah budaya.
3. pengukur pH
4. Pelat panas.
5. Keseimbangan.
6. Mandi air
7. Pembakar bunsen.
8. Oven microwave.
9. Autoklaf.
10. Kulkas.
11. Daerah perpindahan:

(a) Kotak plastik. Ini dapat disterilkan dengan sinar Ultraviolet (UV) dan dengan menyeka permukaan lantai dengan etil alkohol 95% saat beroperasi

(b) Tudung kayu.

(c) Kabinet aliran udara laminar. Motor kecil meniupkan udara ke dalam unit terlebih dahulu melalui filter kasar, di mana partikel debu besar dipisahkan, dan selanjutnya melewati filter HEPA 0,3 pm. Udara diarahkan ke bawah (unit aliran vertikal) atau ke luar (unit aliran horizontal) di atas permukaan kerja.

Udara yang keluar dari filter halus sangat bersih (bebas dari kontaminan jamur atau bakteri) dan kecepatannya (27 ± 3 m/mnt) cukup mencegah kontaminasi mikro area kerja oleh pekerja yang duduk di depan kabinet.

4. Ruang budaya:

Semua jenis jaringan tanaman diinkubasi dalam kondisi suhu, kelembaban, pencahayaan, dan sirkulasi udara yang terkontrol dengan baik.

Ruang kultur harus memiliki cahaya dan suhu yang dapat diprogram selama 24 jam. AC dan heater digunakan untuk menjaga suhu sekitar 25 ± 2°C.

Pencahayaan diatur dari segi kuantitas dan durasi penyinaran dengan menggunakan jam otomatis. Kultur ditumbuhkan dalam cahaya yang menyebar meskipun ketentuan juga harus dibuat untuk mempertahankan kultur dalam intensitas cahaya yang lebih tinggi serta kegelapan total. Kisaran kelembaban 20 – 98%, dapat dikontrol hingga ± 3% dan ventilasi udara paksa yang seragam.

Rak yang dirancang khusus terbuat dari kaca, jaring kawat kaku atau kayu disediakan di ruang kultur untuk kultur yang membusuk. Setiap rak diterangi oleh satu set tabung neon yang terpisah.

Wadah biakan (labu, stoples, dan cawan Petri) dapat ditempatkan langsung di rak atau baki dengan ukuran yang sesuai, sedangkan tabung biakan memerlukan rak logam untuk menahannya.

Karakteristik inkubator dan ruang pertumbuhan:

1. Kisaran suhu – 2-40°C.
2. Kontrol suhu, ± 0,5°C.
3. Keamanan batas suhu tinggi dan rendah.
4. Perekam suhu terus menerus.
5. 24 jam. pemrograman suhu dan cahaya.
6. Pencahayaan neon yang dapat disesuaikan hingga 10.000 lux.
7. Kisaran kelembaban relatif 20-98%.
8. Kontrol kelembaban relatif, ±3%.
9. Distribusi udara paksa yang seragam.
10. Kapasitas hingga 0,7 m ^{3 dari} ruang rak 0,5 m ²
11. Area pengumpulan data:

Pertumbuhan dan perkembangan jaringan yang dikultur secara in vitro umumnya dipantau dengan mengamati kultur secara berkala di ruang kultur atau inkubator di mana kultur tersebut dipelihara dalam kondisi lingkungan yang terkendali. Pengamatan berbasis data dalam kondisi aseptik dapat dikumpulkan dengan menggunakan lemari aliran udara laminar atau area transfer yang sesuai yang dirancang untuk tujuan tersebut, sedangkan untuk pemeriksaan mikroskopis kultur, ruang laboratorium biasa digunakan.

Kultur Jaringan Tumbuhan sebagai Sumber Obat: