Bertujuan untuk menyiapkan tunggangan basah suatu bakteri, untuk mengamati bentuk, ukuran dan susunan alaminya dalam kondisi hidup.
Tujuan:
Sel-sel bakteri dapat terlihat dengan mudah dan jelas, ketika diwarnai oleh noda, tetapi pada sebagian besar proses pewarnaan, sel mati dan kehilangan bentuk dan ukuran alaminya karena fiksasi panas serta karena paparan bahan kimia (noda, asam dan alkohol).
Percobaan ini bertujuan untuk mengamati bentuk, ukuran dan susunan alami bakteri pada kondisi hidup. Motilitas tidak dapat diamati pada pemasangan basah, karena sel ditekan di antara kaca objek dan kaca penutup.
Prinsip:
Pada sediaan basah, setetes suspensi bakteri ditempatkan pada slide, ditutup dengan kaca penutup dan diamati di bawah mikroskop majemuk atau lebih disukai di bawah mikroskop medan gelap atau mikroskop fase kontras dengan menggunakan objektif perendaman minyak.
Bahan yang Dibutuhkan:
Kaca objek, kaca penutup, petroleum jelly, minyak imersi (minyak cedar wool atau parafin cair), kultur bakteri (pada media padat atau dalam suspensi cair), loop dan mikroskop (senyawa, medan gelap atau kontras fase).
Prosedur:
- Slide dibersihkan dengan benar di bawah air ledeng, sehingga air tidak tertinggal sebagai tetesan di permukaannya (Gambar 5.2).
- Slide dikeringkan dengan menyeka dengan kertas bibulous dan selanjutnya dipindahkan di atas api atau dijemur di bawah sinar matahari.
- Jika bakteri telah ditumbuhkan pada media padat (sebagai biakan miring atau biakan lempeng), setetes air suling diletakkan di tengah kaca objek. Sebuah loop disterilkan dengan memanaskannya di atas api sampai merah panas. Itu didinginkan hingga suhu kamar. Kemudian, secara aseptis sebagian kecil biakan bakteri dikerok oleh loop dan dipindahkan ke tetesan air.
Suspensi bakteri dibuat dengan mencampurkan simpul bakteri secara perlahan ke dalam tetesan air, sedemikian rupa sehingga tetesan tersebut tidak menyebar. Jika ditumbuhkan dalam media cair sebagai suspensi, secara aseptis setetes suspensi bakteri ditempatkan langsung di tengah kaca objek, menggunakan ose yang disterilkan dengan api.
- Petroleum jelly atau bahan serupa diterapkan di sekitar tetesan, sehingga ketika kaca penutup menutupi tetesan, penguapan dan pengaruh aliran udara diminimalkan.
- Kaca penutup disimpan dalam posisi miring di dekat tetesan suspensi bakteri dengan salah satu ujungnya menyentuh kaca objek.
- Pelan-pelan kaca penutup diturunkan hingga menyentuh permukaan tetesan.
- Kemudian kaca penutup dilepas, sehingga tetesan suspensi bakteri menyebar ke segala arah di bawah kaca penutup. Harus diperhatikan agar tidak terbentuk gelembung udara pada suspensi.
- Slide dijepit di atas panggung mikroskop majemuk dan diamati menggunakan daya rendah dan tujuan kering tinggi. Kemudian, setetes minyak imersi diteteskan pada kaca penutup dan diamati menggunakan mikroskop objektif minyak imersi. Lebih disukai, mikroskop kontras fase atau medan gelap harus digunakan untuk pengamatan yang jelas.
Pengamatan (Under Oil-immersion Objective):
- Bentuk bakteri:
Bulat (coccus)
Berbentuk batang (basil)
- Susunan bakteri:
Seperti koma (vibrio)
Spiral (spirocheta)
Pasangan (diplobacillus/diplococcus)
Dalam empat (tetrad)
Berantai (streptococcus/streptobacillus)
Cluster seperti anggur (staphylococcus)
Kuboid (sarcinae atau oktet)
- Ukuran bakteri:
Dengan perkiraan mata, buatlah gambar bidang di bawah tujuan perendaman minyak.
