Tiga jenis di mana teknik aglutinasi sel diklasifikasikan adalah: 1. aglutinasi langsung, 2. aglutinasi tidak langsung (pasif), dan 3. aglutinasi terbalik (pasif).
1. Uji Aglutinasi Langsung:
Sel (seperti bakteri, jamur, dan eritrosit) dan antigen partikulat yang tidak larut dapat langsung diaglutinasi oleh antibodi spesifiknya. Antibodi memiliki dua lengan Fab yang dapat mengikat antigen pada dua sel. Demikian juga banyak molekul antibodi berikatan dengan sejumlah sel untuk membentuk kisi.
Formasi kisi ini terlihat secara visual sebagai gumpalan. Oleh karena itu, pembentukan gumpalan menunjukkan adanya pengikatan antigen-antibodi. Kurangnya aglutinasi menunjukkan tidak adanya reaksi antigen-antibodi.
Kegunaan Tes Aglutinasi Langsung:
sebuah. Identifikasi mikroba:
Koloni bakteri yang tumbuh dalam media kultur diidentifikasi dengan menggunakan antisera yang diketahui terhadap mikroba. Antiserum antimikroba yang menghasilkan aglutinasi terlihat mengidentifikasi bakteri.
- Diagnosis infeksi mikroba dengan mendeteksi adanya antibodi terhadap mikroba dalam serum. Antigen mikroba yang diketahui bercampur dengan serum pasien dan terjadinya aglutinasi menunjukkan adanya antibodi serum terhadap mikroba.
- Pengelompokan darah ABO eritrosit manusia (dengan menggunakan antisera).
Tes aglutinasi dilakukan baik pada slide (tes aglutinasi slide) atau dalam tabung (tes aglutinasi tabung).
saya. Tes aglutinasi slide sederhana dan mudah dilakukan dan hanya membutuhkan beberapa menit untuk melakukan tes.
- Tes aglutinasi tabung digunakan untuk mengukur jumlah antibodi serum terhadap mikroba dengan mengencerkan serum secara serial dan kemudian mencampur serum yang diencerkan dengan antigen mikroba dalam jumlah konstan. Setelah inkubasi yang sesuai, pengenceran serum tertinggi yang menunjukkan aglutinasi yang terlihat diambil sebagai titer serum (Misalnya, uji tabung Widal, uji tabung Brucella). Titer mencerminkan konsentrasi antibodi dalam serum; semakin tinggi titer, semakin banyak konsentrasi antibodi.
Tes slide untuk mendeteksi antibodi serum terhadap agen infeksius digunakan sebagai tes skrining awal. Sera dari tes slide positif harus diuji ulang dengan tes tabung untuk mengkonfirmasi hasil tes slide. Tes slide dapat memberikan hasil yang menyesatkan, terutama dengan tingkat antibodi serum yang sangat tinggi (misalnya fenomena prozon dengan antibodi brucella).
Ada banyak variabilitas intrinsik dalam sistem uji aglutinasi. Oleh karena itu, ketika nilai titer serum pasien diperiksa pada dua kesempatan, perbedaan antara nilai titer menjadi signifikan, hanya ketika nilai titer berbeda setidaknya dua pengenceran ganda [atau perbedaan dua tabung (empat kali nilai pertama) ] (mis. Dalam uji tabung Widal, serum diencerkan dalam dua lipatan: 1 dalam 20, 1 dalam 40,1 dalam 80, 1 dalam 160, 1 dalam 320, dan 1 dalam 640. Jika pasien menjalani uji Widal pertama titer 1 dalam 160, titer uji Widal kedua bermakna jika 1 dalam 640 atau lebih dari 1 dalam 640.)
Tes antibodi heterofil:
(Sering disebut sebagai tes mono-spot) Tes antibodi heterofil adalah tes hemaglutinasi untuk mendeteksi antibodi terhadap virus Epstein Barr (EB) yang menyebabkan penyakit infeksi mononukleosis. Antibodi IgM yang terbentuk selama infeksi mononukleosis bereaksi silang dengan antigen permukaan sel darah merah kuda (mungkin karena kesamaan antigenik antara virus EB dan protein permukaan sel darah merah kuda) dan menyebabkan hemaglutinasi.
Uji Aglutinasi Tidak Langsung (Pasif):
Dalam uji aglutinasi tidak langsung, antigen terlarut yang diketahui dilapisi ke sel lain (misalnya, eritrosit domba atau kalkun ) atau partikel inert (misalnya, lateks, bentonit, arang, polistiren), yang bertindak sebagai pembawa pasif antigen.
Banyak antigen dapat dilapisi ke eritrosit secara langsung atau setelah merawat eritrosit dengan formalin, asam tanat, atau glutaraldelyde. Keuntungan menggunakan eritrosit untuk pelapisan adalah ketersediaannya yang mudah dan kemampuan penyimpanannya. Apalagi tes ini sangat sensitif.
Serum uji dicampur dengan eritrosit atau lateks berlapis antigen yang dikenal.
sebuah†”
Jika serum uji memiliki antibodi, eritrosit atau partikel lateks menggumpal dan menghasilkan gumpalan yang terlihat.
Uji hemaglutinasi:
Tes hemaglutinasi sederhana dan mudah dilakukan. Tes kualitatif dan kuantitatif dapat dilakukan dengan teknik hemaglutinasi.
Serum uji diencerkan secara berurutan dalam larutan pengencer dalam sumur pelat mikrotiter.
sebuah†”
Sel darah merah yang dilapisi dengan antigen yang diketahui ditambahkan dalam volume yang sama ke semua sumur. Kontrol positif yang tepat, kontrol negatif, dan kontrol reagen digunakan. Pelat dikocok dengan baik dan diinkubasi di tempat yang bebas dari getaran.
sebuah†”
Setelah inkubasi, cawan dibaca dengan mata telanjang untuk aglutinasi.
Reaksi positif:
Sumur dengan aglutinasi menunjukkan pengikatan sel darah merah yang dilapisi antigen dengan antibodi yang sesuai dalam serum uji. Bagian bawah sumur aggluti nated digambarkan memiliki penampilan karpet.
Reaksi negatif:
Di sumur di mana tidak ada pengikatan antigen-antibodi, aglutinasi sel darah merah tidak terjadi. Karena gravitasi, sel darah merah mengendap di dasar sumur dan memberikan tampilan seperti “kancing”, di mana tepi “kancing” tajam dan teratur.
Titer antibodi serum uji:
Pengenceran serum yang memberikan 50 persen aglutinasi dibandingkan dengan sumur yang menunjukkan aglutinasi lengkap (100 persen) adalah titer antibodi serum uji. Kit hemaglutinasi tersedia untuk deteksi antibodi terhadap virus Hepatitis B, HIV, tiroglobulin, dll.
Aglutinasi partikel gelatin:
Partikel gelatin adalah pengganti eritrosit untuk tes aglutinasi partikel. Partikel gelatin khusus (berdiameter sekitar 3 µm) memiliki permukaan yang sangat hidrofilik dan oleh karena itu tidak ada bahan pengikat non spesifik yang terdapat dalam spesimen. Partikel gelatin dibuat dengan pemisahan fasa dan tiga dimensi cross-linking pada suhu 40°C. Partikel yang dihasilkan difiksasi dengan formaldehida atau gluteraldehida.
Partikel gelatin tidak memiliki antigenisitas, dan karena itu mereka bebas dari masalah yang terkait dengan uji bangsa hemaglutinasi (seperti antibodi heterofil, yang dapat bereaksi secara nonspesifik dengan sel darah merah dan memberikan aglutinasi positif palsu dalam uji hemaglutinasi).
Tes aglutinasi lateks:
Selain eritrosit dan gelatin, beberapa partikel lain juga dapat digunakan untuk membawa antigen pada permukaannya. Partikel yang dilapisi antigen tersebut akan menggumpal bila dicampur dengan antibodi spesifik. Antigen protein dan polisakarida dapat dilapisi ke partikel lateks. Partikel yang dilapisi antigen ini akan menggumpal dengan adanya antibodi.
Uji hemaglutinasi pasif terbalik:
Dalam tes hemaglutinasi pasif terbalik, sel darah merah dilapisi dengan antibodi yang diketahui. Kit ini digunakan untuk mendeteksi antigen dalam sampel uji, seperti HB s Ag dalam serum.
Tes Rose-Waaller:
Ini adalah tes hemaglutinasi pasif untuk mendeteksi faktor rheumatoid. Salah satu ciri faktor rheumatoid manusia adalah dapat berikatan dengan IgG manusia dan juga IgG kelinci. Eritrosit domba dilapisi dengan antibodi IgG anti-domba dalam jumlah subaglutinasi (dibesarkan pada kelinci). Faktor rheumatoid mengaglutinasi eritrosit domba yang dilapisi dengan IgG anti-domba kelinci.
Uji Flokulasi:
Flokulasi adalah jenis lain dari uji pembentukan kompleks antigen-antibodi, yang digunakan untuk mendeteksi dan menghitung antibodi. Berbeda dengan aglutinasi dan presipitasi (di mana kompleks antigen-antibodi mengendap di dasar tabung), pada uji flokulasi kompleks antigen-antibodi beragregasi dan tetap dalam suspensi sebagai flokulan dan hasilnya dibaca di bawah mikroskop. Teknik ini digunakan dalam uji VDRL (uji laboratorium penelitian penyakit kelamin) untuk mendeteksi antibodi terhadap Treponema pallidum, bakteri penyebab sifilis.
Hemaglutinasi Virus:
Hemaglutinasi virus adalah kategori khusus aglutinasi eritrosit, yang tidak melibatkan reaksi antigen-antibodi. Virus tertentu berikatan dengan protein permukaan sel darah merah dan pengikatan ini menyebabkan aglutinasi sel darah merah secara spontan.
Aglutinasi spontan sel darah merah oleh virus dapat dicegah dengan antibodi anti-virus spesifik. Antibodi terhadap virus berikatan dengan antigen permukaan virus dan mencegah interaksi virus dan sel darah merah, dan akibatnya, sel darah merah tidak diaglutinasi. Ini disebut uji penghambatan hemaglutinasi virus dan digunakan untuk mengukur antibodi virus dalam serum pasien.
Tes untuk aglutinin dingin:
Antibodi yang terbentuk selama infeksi tertentu (terutama Mycoplasma pneumoniae) dan penyakit autoimun memiliki kemampuan khusus untuk menggumpalkan sel darah merah pada suhu 4°C. Antibodi ini disebut aglutinin dingin.
Pengenceran serial serum pasien diinkubasi dengan 1 persen sel darah merah pada suhu 4°C semalam.
sebuah†”
Tabung diperiksa untuk adanya aglutinasi. Jika terjadi aglutinasi, tabung diinkubasi kembali pada suhu 37°C.
sebuah†”
Deaglutinasi sel darah merah pada suhu 37°C menunjukkan bahwa serum memiliki aglutinin dingin. Uji aglutinin dingin digunakan untuk mendiagnosis infeksi Mycoplasma pneumoniae. 50 hingga 80 persen pasien yang terinfeksi Mycoplasma pneumoniae akut memiliki aglutinin dingin yang termasuk tipe IgM.
